Кишкова паличка-постійний мешканець товстого відділу кишківника людини і всіх тепло-кровних тварин. індикатор фекального забруднення зовнішнього середовища і непрямий показу-тель наявності у воді хвороботворних мікробів
Колі-індекс (індекс кишкової палички) - це число ки-м'язових паличок, виявлених в 1 л досліджуваної води.
Коли-титр визначають методами бродильних проб. заснований на здатності кишкової палички розвиватися при підвищених температурах і зброджувати цукру (маніт, глюко-зу та ін.) з виділенням газу.
1. ставлять першу бродильно пробу: різні розведення досліджуваної води за допомогою стерильний-них піпеток вносять в колби і пробірки зі спеціальними уг-леводнимі рідкими середовищами (Ейкман)
Співвідношення між середовищем і засеваемой водою повинно бути 1: 2. Посіви вирощують в термостаті при 43-44 ° С в тече-ня 24 ч. При зазначеній температурі пригнічується розвиток мікроорганізмів, які не мають санітарно-показового зна-чення для води. Потім переглядають посіви (наявність пухирців газу в поплавцях, зміна кольору, помутніння).
2. за допомогою бактеріальної петлі справи-ють висів в чашки Петрі із середовищем Ендо і вирощують куль-туру при 37 ° С 24 год. Утворюють типові темно-червоні, яскраво-червоні або рожеві колонії з темним центром, мають металевий блиск або без негоПрі відсутності характерного зростання на пробу дають негативну відповідь.
При наявності типових колоній з них роблять мазки, фарбують за Грамом і проводять мікроскопію. Якщо в мазках виявляють дрібні неспорообразующие грамнегативні палички, то переходять до 3 пов.
3. роблять пересів в розведену рідку вуглеводну сере-ду (Ейкман і ін.). Посіви вирощують при 43- 44 ° С протягом 24 год, після чого враховують остаточно. При наявності в посівах помутніння, газоутворення і зміни кольору дають позитивну відповідь, результати якого Вира-жають у вигляді колі-титру.
Колі-індекс визначають методом мембранних фільтрів-пористі плівки з мікроклет-чатку. піддають стерилізації подвійним кип'ятін третьому в дистильованої воді протягом 15-20 хв. Потім сте-рільним пінцетом фільтри поміщають на приладу Зейтца. проводять фільтрацію під вакуум-розумом певного кол-ва досліджуваної води (через один мембранний фільтр - не більше 100 мл води).
фільтр кладуть осадом вгору на поверхню середовища Ендо, залитої в чашку Петрі, щільно притискаючи до сере-де. В одну чашку можна помістити 4-5 фільтрів. Після куль-тівірованія в термостаті при 37 0 С протягом 18-24 год подсчі-ють виросли на фільтрі колонії, характерні для груп-пи кишкової палички. беруть матеріал для мазків, фарбують їх по Граму і проводять мікроскопію.
Якщо в мазках присутні дрібні грамнегативні неспорообразующие палички, з решти колонії де-гавкають пересівши в пробірки з невеликим об'ємом рідкої вугле-водного середовища. Посіви вирощують при 43-44 ° С протягом 24 год. Наявність газоутворення + р-я
Визначення чутливості мікроорганізму до антибіотиків методом стандартних дисків.
Культуру засівають газоном на поживний агар або середовище АГВ в чашці Петрі.
Середа АГВ: сухий поживний рибний бульйон, агар-агар, натрій фосфат двозаміщений.
На засіяну поверхню пінцетом поміщають на однаковій відстані одна від одної паперові диски, що містять певні дози різних антибіотиків. Посіви інкубують при 37 ° С до наступного дня. По діаметру зон затримки росту досліджуваної культури бактерій судять про її чув-ствительности до антибіотиків.
Визначення чутливості мікроорганізму до антибіотиків методом серійних розведень
Осн р-р АБ готують з пом буф розчину або спец р-ля. Серійні розведення препарату готують в пробірках, утримуючі 1 мл м'ясо-Пепти бульйону. У 1-ю проб вносять 1 мл исходн р-ля, після чого готують серію розведень препарату. У кожн вносять 0,1 мл Бакта сусп. Готують контролі (мпб + сусп, мпб_АБ). Інкубується. Відсутність помутніння - затримка росту в присутств даної конц аб
Реакція гемолізу: техніка постановки, механізм реакції, облік результатів.
Є різновидом реакції лізису. Як АГ в цій реакції застосовують еритроцити, які лізуються гемолізини в присутності комплементу. Для постановки реакції гемолізу необхідні: 1) еритроцити барана; 2) гемолітична сироватка, яка містить гемолізини до баранячим еритроцитів і 3) комплемент.
Протікає в дві фази. У першій фазі відбувається взаємодія між еритроцитами і гемолітичної сироваткою, у другій-сенсибілізовані еритроцити фіксують комплемент і настає лізис.
Для постановки реакції гемолізу в 1 пробірку вносять по 0,5 мл гемолітичної сироватки, комплементу, розведеного 1:10. 3% суспензії баранячих еритроцитів по осадку. 2 пробірка служить контролем комплементу, 3 пробірка -гемолитический сироваткою, 4 пробірка -ерітроцітов. Облік після інкубації суміші протягом 1 годину.
25. Біологічні методи досліджень спрямовані на визначення наявності токсинів збудника в досліджуваному матеріалі і на виявлення збудника (особливо при незначному вихідному вмісті в досліджуваному зразку). Методи включають зараження лабораторних тварин досліджуваним матеріалом з наступним виділенням чистої культури патогена або встановленням факту присутності мікробного токсину та його природи. Моделювання експериментальних інфекцій у чутливих тварин - важливий інструмент вивчення патогенезу захворювання і характеру взаємодій всередині системи мікроорганізм-макроорганізм. Для проведення біологічних проб використовують тільки здорових тварин певних маси тіла і віку. Інфекційний матеріал вводять всередину, в дихальні шляхи, внутрішньочеревно, внутрішньовенно, внутрішньом'язово, внутрішньошкірно і підшкірно, в передню камеру ока, через отвір трепанації черепа, субокципітально (в більшу цистерну головного мозку). У тварин прижиттєво забирають кров, ексудат з очеревини, після загибелі - кров, шматочки різних органів, СМЖ, ексудат з різних порожнин.
26. Орієнтовна реакція аглютинації (техніка постановки, облік результатів).
ОРА виконують перед постановкою розгорнутої реакції для того, щоб отримати попереднє уявлення про виділений вигляді або серовар бактерій
Ставлять при кімнатній температурі на предметних стеклах. Для цього пастерівської піпеткою наносять на скло окремо один від одного краплі сироватки в невеликих розведеннях (1: 10-1: 20) і дві краплі 0,5% розчину натрію хлориду (Контроль). У кожну краплю (за винятком контрольної) вносять підозрілі колонії, зняті з поверхні щільного поживного среди.Перемешівают до помутніння. Результати реакції враховують через 5-10 хвилин. При позитивній реакції в краплі з сироваткою з'являються великі чи дрібні пластівці, при отріцательной- рідина залишається рівномірної каламутній.
27. Розгорнута реакція аглютинації (техніка постановки, облік результатів).
Для визначення AT в сироватці крові хворого ставлять розгорнуту реакцію аглютинації (РА). Для цього до серії розведень сироватки крові додають діагностикум - суспензія вбитих мікроорганізмів або частки з сорбованих Аг. Максимальне розведення, що дає аглютинацію Аг, називають титром сироватки крові.
Агглютинацией називають склеювання бактерій при дії на них специфічних АТ в присутності електроліту. Її використовують: 1) для визначення виду і серовар виділених бактерій, 2) для виявлення АТ в сироватці крові хворого (серодиагностика).
Для постановки РА необхідні три компоненти: АГ (агглютиноген), АТ (агллютінін) і електроліт (ізотонічний розчин натрій хлориду). Як АГ в РА застосовують 18-24ч суспензії живих або убитих формаліном, спиртом бактерій. Найбільш стабільним АГ є суспензії убитих мікроорганізмів.
На предметне скло наносять краплями:
1-ша крапля: - агглютинируют сироватка до збудників дизентерії;
2-а крапля: - агглютинируют сироватка до збудників черевного тифу;
Ья крапля: - фізіологічний розчин (контроль).
Додають в кожну краплю досліджувану чисту культуру бактерій. Перемішують.