Обладнання, необхідне для вирощування культури «in vitro»:
1. Стерильне приміщення, в якому будуть проводитися всі операції. Ідеально може підійти акваріум 50/40/40.
2. Духова шафа для стерилізації посуду, інструменту і т.д.
3. Скляні або пластикові контейнери з кришками, які мають достатню термостійкість
4. Скальпель та Шипці
5. Офісний папір формату А4
6. Спиртівка
7. Аерозоль, що містить 70% спирту для обробки поверхонь
8. хлоросодержащие дезинфікуючі засоби для обробки рослин
9. Дезінфікуючий засіб для рук
10. Поживна середу для рослин
Приготування поживного середовища
Традиційно в ролі живильного середовища виступає середовищі MS (Мурасіге-Скуга), яку можна придбати в деяких хімічних компаніях. Але також можна самостійно приготувати відповідну живильне середовище. Всі складові широко доступні:
1. 2 чашки кип'яченої води
2. 1 частина цукрового піску
3. Розведене добриво (половина від норми NPK 10/10/10 в 1 літрі води)
4. Таблетка іноситол 250 мг.
5. ½ таблетки мультивітаміни (з тіаміном)
6. 4 частини агару
Це базова середу. Для приготування середовища з метою мультиплікації і вкорінення необхідно додати ½ частину кокосового молока і ½ чайної ложки солоду. У підсумку на потрібно отримати середу з Ph в діапазоні від 5 до 6. Якщо щось не так, то необхідно домогтися цих показників шляхом підкислення (лимонна кислота) або подщелачивания (харчова сода). Змішайте всі перераховані компоненти в каструлі і варіть на повільному вогні до розчинення агару. Потім розлийте отриману рідину по підготовленим ємностей (приблизно по 2 см.). Закрийте ємності і помістіть їх в духову шафу на 15 хвилин для стерилізації.
Стерилізація інструментів та іншого обладнання
Щипці і скальпелі можуть стерилізувати, будучи обгорнутими у фольгу в духовці протягом 15 хвилин. Також їх можна стерилізувати в хлорного рідини або в спирті з наступним прожарюванням над вогнем.
Стерильна вода необхідна для того, щоб обполіскувати рослина, а стерильна папір для того, щоб його можна було просушіть.Вода може стерилизоваться в скляних ємностях. Папір в паперовому пакеті стерилізується паром в духовій шафі над водою.
Стерлізація рослинного матеріалу
Весь матеріал необхідно стерилізувати в хлоросодержащие рідини (підійде відбілювач) + 3/4 води + 1 частина миючого засобу, який знизить поверхневий натяг). Стерилізація займає 10-20 хвилин. Проводьте періодичне збовтування. Цей процес вб'є бактерії і гриби. При більш тривалому відмочування може відбутися відмирання рослинної тканини, будьте уважні. Промийте рослина двічі в стерильній воді.
Операції в стерильному приміщення
До наступних операцій необхідно підійти з особливою увагою, щоб не дозволити мікроорганізмам перешкодити вашій роботі:
1. Сховайте волосся, засукати рукава і видаліть годинник і інші коштовності. Вимийте свої руки дезинфікуючим засобом, відповідним для шкіри. Одягніть стерильні рукавички.
2. Стерилізуйте внутрішню частину акваріума спиртовим аерозолем і витріть стерильною папером.
3. Розставте всі інструменти які знадобляться вам в роботі.
мультиплікація
Протягом місяця вижили рослини помітно зросли і їх необхідно пересадити на середу, що містить кокосове молоко. Кокосове молоко містить речовини, що сприяють швидкої сегментації і мультиплікації рослини. При пересадці рослини необхідно повторити всі перераховані вище операції, за винятком обробки рослини хлоросодержащие рідиною. Операції проводяться в стерильному акваріумі на вологій стерильної папері. Вологість необхідна для рослини, яке є досить м'яким і може швидко висохнути.
формування кореня
Як тільки рослина досягла як мінімум 2 см у висоту можна почати процес вкорінення. Рослина за звичною схемою пересідає в середу з кокосового молока і солоду. судно культури. Коріння формуються протягом двох - чотирьох тижнів.
Пересадка в грунт (акліматизація)
На даному етапі підготовлені горщики заповнюють стерильною грунтовою сумішшю без додавання добрив. У грунті роблять невелике заглиблення.
За допомогою пінцета дістають Ратен з контейнера і відмивають теплою водою залишки агару з коренів. Рослина поміщають в поглиблення, зволожують з розпилювача і накривають горщик прозорим ковпаком. Поступово привчайте рослина до навколишнього середовища, періодично знімаючи ковпак. Акліматизація відбувається протягом 4-6 тижнів. Потім переходять до звичному методам вирощування.
За матеріалами Horticultural Science Group
Department of Agronomy and Soil Science