Буферні розчини та їх приготування
Хімічні процеси, що протікають в тканинах організму, особливо за участю ферментів, вимагають наявності ряду умов, серед яких важливе значення має рН середовища. Як відомо, ступінь кислотності даного розчину залежить від концентрації іонів Н +. а ступінь його лужно-сті - від концентрації іонів ОН-.
При певній температурі твір поклади-кові і негативно заряджених іонів -Величина постійна. Знаючи один з показників, можна визначити інший. Виходячи з цього положення, в хімії прийнято позначати кислотність або лужність розчину умовно через водневий показник (рН), що представляє балки-рим концентрації іонів Н +. узятий з оберненим знаком. Так, при рН 7,0 концентрація іонів Н + дорівнює концентрації іонів ОН- і розчин має нейтральну реакцію. Чим показник рН менше 7,0, тим концентрація іонів Н + вище (адже показник з протилежним знаком) і тим більше кислотність розчину. Навпаки, чим рН більше 7,0, тим менше іонів Н + в розчині і більш виражені його лужні властивості.
Різні ферменти вимагають для прояву своєї активності різні значення рН.
Так, оптимальне умова для дії лужноїфосфатази при рН 9,0, тоді як для кислої фосфатази потрібно рН 5,0.
Щоб забезпечити найкращі умови для прояву активності гистохимически виявляється ферменту, необхідно, щоб в середовищі інкубації підтримувалося значення рН, оптимальне для даного ферменту. Ця умова досягається введенням в середу інкубації буферних сумішей з заданими значеннями рН. Найбільш поширеними буферними розчинами є фосфатний, ацетатний і трис-буфер.
Приготування буферних розчинів
Перш ніж дати прописи буферних сумішей, необхідно нагадати, що для визначення концентрації розчинів реактивів прийняті поняття молярность (М) і нормальність (N).
Молярность розчину (М) - кількість грам-молей речовини, що містяться в 1 л розчину. Грам-моль - молекулярна маса даної речовини, виражена в грамах. Наприклад, для приготування розчину в концентрації 0,2 М необхідно на 1 л розчину взяти речовина в кількістю-стве, рівному 0,2 його молекулярної маси.
Нормальність (N) - кількість грам-еквівалентів в 1 л розчину.
Грам-еківалент - кількість даної речовини, хімічно рівноцінне в даній реакції 1 грам-атома водню.
Для складних речовин - це кількість речовини, відповідне прямо або побічно при хімічних перетвореннях 1 граму водню або 8 грам кисню.
Е підстави = Моснованія / число заміщаються у реакції гідроксильних груп
Е кислоти = Мкіслоти / число заміщаються у реакції атомів водню
Е солі = Мсолі / твір числа катіонів на його заряд