ОСІМЕНІННЯ І ІНКУБАЦІЯ ІКРИ
Для запліднення ікри від декількох попередньо отсаженних зрілих самців отримують сперму, яка повинна бути тільки хорошої якості: помірної густоти і жовтуватого забарвлення. Черевце самця обмивають і обтирають сухою чистою ганчіркою, після чого, згинаючи спину і хвостове стебло риби, отримують сперму. Її збирають в чисту, абсолютно суху скляну баночку. Так як не вся сперма дозріває одночасно, кожен самець може бути використаний кілька разів.
Визначення якості сперми самців проводиться по вимірюванню об'єму еякуляту (суспензії окремих сперміїв в сперміальной рідини, що містить дуже мало органічних речовин), тривалості руху сперматозоїдів, співвідношенню живих і мертвих сперміїв, їх концентрації, запліднюючої здатності, з'ясовується по відсотку запліднення, візуальною оцінкою.
Обсяг еякуляту (окремих порцій сперміїв, що виводяться назовні) служить одним з важливих показників оцінки статевої діяльності самців. Він дуже важливий при відпрацюванні дозувань гіпофізарних ін'єкцій. Обсяг еякуляту вимірюють за допомогою мірного посуду з точністю до 0,1 -0,2 см 3.
Тривалість руху сперматозоїдів встановлюють за допомогою секундоміра. Спостереження проводять наступним чином. Сперму беруть з пробірки препаровальной голкою і поміщають на годинникове скло, на яке заздалегідь внесена крапля води. Сперматозоїди розглядають під мікроскопом. Зупиняють секундомір, коли велика частина сперміїв (більш 50-69%) переходить від поступального руху до коливального. Співвідношення в еякуляті живих і мертвих сперміїв з'ясовують двома методами: по-перше, глазомерной оцінкою за п'ятибальною шкалою і, по-друге, обчисленням відсотка життєздатних сперміїв по їх відношенню до фарбування.
Перший спосіб дає результати більш швидко, але він менш точний.
Визначення рухливості сперматозоїдів за п'ятибальною шкалою було запропоновано Г. М. Персовим:
бал 5 - помітно рух всіх сперміїв. Рух тільки поступальний і рухливість сперміїв настільки велика, що важко акцентувати увагу на якому-небудь одному сперматозоїді;
бал 4 - добре виражено поступальний рух, але в поле зору зустрічаються спермії з так званими звивистими і коливальними рухами;
бал 3 - зигзагообразное і коливальний рух переважає над поступальним, вже є нерухомі спермії;
бал 2 - поступального руху майже немає, є тільки коливальний і зрідка зигзагообразное; дуже великий відсоток нерухомих сперміїв (до 75%);
бал 1 - все спермії без листя.
Для запліднення слід використовувати тільки сперму, оцінену 4 або 5 балами.
Для з'ясування співвідношення за п'ятибальною шкалою маленьку краплю сперми поміщають на предметне скло, для її активації додають краплю води, препарат швидко накривають покривним склом і розглядають під великим збільшенням мікроскопа (збільшення в 400-600 разів).
Окомірний підрахунок проводять за допомогою камери Горяєва, на яку змішувачем (меланжери) наносять змішану з водою сперму. Сперматозоїди, збільшені в 280-400 разів, підраховують в п'яти великих квадратах рахункової камери, кожен з яких складається з 16 квадратиків (всього 80 малих квадратиків), і в великих квадратах, розташованих по діагоналі сітки.
Концентрацію сперміїв (в млн. / Мм3) підраховують за формулою:
С - концентрація сперміїв;
n - число полічених малих квадратиків (80);
D - ступінь розведення (дорівнює 200);
v - обсяг малого квадратика (1/4000 мм 3);
N - число великих квадратів,
1000000 - множник для отримання результатів, млн. / Мм 3.
Окомірний підрахунок проводять також фотоелектрокалоріметріческім методом, який заснований на здатності сперми послаблювати пропускається через неї пучок світла пропорційно її концентрації. Такий підрахунок здійснюється за допомогою фотоелектрокалориметри.
У порівнянні зі лічильної камерою Горяєва застосування фотоелектрокалориметри дозволяє прискорити процес визначення концентрації сперміїв.
При візуальній оцінці якості сперми використовують такі показники, як колір і консистенцію. Сперма хорошої якості має консистенцію цільного молока, а поганого - знежиреного. У першому випадку вона має білий колір, а в другому - блакитний.
Визначення співвідношення живих і мертвих сперміїв шляхом забарвлення проводиться за допомогою 5% -го водного розчину еозину натрію. Для цього краплю сперми змішують з більшою краплею фарби і шліфованим краєм іншого скла роблять тонкий мазок на предметному склі. Потім швидко висушують і під мікроскопом (при збільшенні в 300-400 разів) переглядають у п'яти полях зору поспіль по 100 сперміїв. Мертві спермии фарбуються в рожевий колір, а живі на рожевому тлі головки мають білий колір. Показники, що характеризують сперму, представлені нижче (Таблиця 1).
Показники, що характеризують сперму
Існує три способи запліднення ікри: сухий, напівсухий, мокрий:
Сухий спосіб. Зводиться до того, що до ікрі, змоченою порожнинної рідиною, в яку занурені яйця в тілі самок, доливають сперму і ретельно перемішують їх, а потім додають воду. Запліднююча здатність «сухий» сперми при зберіганні її при температурі 1 -4 ° С, по А. І. Шмідтове, зберігається до 5 діб, однак перед вживанням якість такої сперми обов'язково перевіряють.
Мокрий спосіб (запропонований А. Н. Державіним). Здійснюється в такий спосіб. Ікру промивають водою ще до запліднення, що призводить до видалення порожнинної рідини, і лише потім доливають сперму.
Напівсухий спосіб (розроблений В. П. Врасський) (раніше він називався сухим, або російською), відрізняється тим, що перед осіменінням сперму розводять водою.
Багаторічні досліди доктора біологічних наук А. С. Гінзбурга показали, що найкращі результати виходять при застосуванні напівсухого способу, коли усувається несприятливий вплив на сперму порожнинної рідини, звичайне при сухому способі.
Застосування мокрого способу призводить до активації частини ікри ще до запліднення та, як наслідок, до зниження відсотка запліднення. Часто утворюються грудки ікри, які не можуть бути використані в подальшій роботі.
Техніка осіменіння ікри осетрових зводиться до наступного. У емальовані тази збирають ікру від кожної самки окремо. Сперму збирають також в сухі судини окремо від кожного самця. Запліднення проводять не пізніше ніж через 10-20 хв після взяття ікри. Затримка може привести до погіршення результатів запліднення.
А.С. Гінзбург для запліднення рекомендує брати суміш сперми 3-5 самців з розрахунку 10 см 3 сперми на 1 кг ікри і розводити її водою в 200 разів. Так, для запліднення 8 кг ікри осетра треба взяти 80 см3 сперми і 16 л води.
Перед осіменінням з таза з ікрою зливають надлишок порожнинної рідини. За допомогою мірного циліндра необхідне за розрахунком кількість сперми виливають у відро з водою, швидко розмішують і відразу доливають до ікрі. Потім протягом 3-5 хв ікру круговими рухами тазу ретельно перемішують з розведеною спермою, після чого воду зі спермою зливають.
Незабаром після запліднення ікра осетрових стає клейкою, можуть утворитися грудки і ікра може загинути. Тому для звільнення від невикористаної сперми, слизу, порожнинної рідини та інших домішок ікру поміщають в широкий таз і промивають водою. Потім ікру обесклеівают.
Для цього в таз з ікрою наливають воду з домішкою чистого річкового мулу (на 1 кг ікри 0,5 л густої суспензії мулу і 4 л води) і перемішують (ікра повинна бути весь час в русі) до тих пір, поки ікринки не перестануть склеюватися .
Після обесклеивания ікру промивають чистою водою і потім поміщають в інкубаційні апарати. Обесклеивания ікри зазвичай триває 40-60 хв незалежно від видової приналежності.
Крім мулу, ікру можна обесклеівать суспензією крейди, таніну, після яких на інкубіруемой ікрі розвивається менше сапролегнія.
Обесклеивания - дуже важка і трудомістка операція. Для полегшення її Р.К. Латипов сконструював спеціальний апарат, що дозволив механізувати процес відмивання ікри (Рис. 1).
Мал. 1 Апарат Р. К. Латипова для обесклеивания ікри:
1 кришка, 2 - сальник, 3 - приводний вал, 4 -дерев'яні рамки, 5-гумові лопаті
В апараті Латипова відмивання ікри, завантаженої в барабан, здійснюється за допомогою чотирьох трилопатевих гумових мішалок, довільно встановлених відносно один одного. Приводний вал, на якому змонтований вал барабана, приводиться в обертання шківних фрикційної передачею від групового приводу.
В апарат закладають до 3 кг ікри, робочий об'єм барабана дорівнює 33 л. Витрата води 2 - 2,5 л / хв. За якістю (відсоток запліднення, вихід личинок з інкубаційних апаратів) ікра, відмита за допомогою апарату Латипова, не відрізняється від ікри, відмитої вручну.
Інший спосіб обесклеивания ікри був запропонований Е.В. Орловим (Рис. 2).
Мал. 2 Схема апарату Е.В. Орлова для обесклеивания ікри і його монтаж в стійці.
1-циліндрична ємність з подвійним дном, 2-патрубок для подачі повітря, 3-зовнішнє дно, 4 вкладиш, 5-отвори для проходу повітря, 6-труба, 7-відводи, 8-кран для зниження тиску в системі, 9 гумовий шланг, 10-гвинтовий затиск, 11-стійка, 12-рукоятка
Винайдений ним апарат являє собою циліндр з подвійним дном, що приєднується до системи подачі повітря, одержуваного від компресора. Обесклеивания роблять у такий спосіб. У циліндр подають повітря, потім в нього наливають обесклеівающую зваж і регулюють краном витрата повітря, щоб бульбашки перемішували рідина в режимі кипіння.
Після цього в апарат завантажується ікра і починається обесклеивания.
Пристосування для перемішування ікри являє собою перфорований вкладиш, жорстко закріплений в нижній частині ємності і пов'язаний у вигляді патрубка і гнучкого шланга з системою подачі стисненого повітря.
Принцип роботи апарату Орлова ліг в основу апарату обесклеивания ікри АОИ, сконструйованого в спеціальному конструкторському бюро Міністерства рибного господарства СРСР - Техрибвод.
Апарат являє собою трубчасту раму. На ній є 5 судин для обесклеивания ікри місткістю по 11 л. У нього завантажують 2-3 кг ікри.
У верхній частині судин є водозбірники і трубопроводи зливу. На рамі змонтований відкидний столик для ємностей з відмитої ікрою і зливний лоток. До судинах гнучкими шлангами підводиться повітря і вода, витрата яких в кожній посудині регулюється вентилями.
Перед обесклеивания в судини заливається розчин річкового мулу і закладається ікра. Обесклеивания здійснюється барботированием вмісту судин за допомогою подається знизу повітря. Після закінчення обесклеивания подається вода і проводиться відмивання ікри від зайвого мулу.
Особливістю апаратів АОИ є те, що в них немає рухомих механічних частин, що травмують ікру.
Ікру осетрових можна інкубувати внезаводскім і заводським способами. У першому випадку ікру інкубують в водоймі, у другому - на березі.
При внезаводском способі рибоводний процес закінчується випуском личинок в річку або озеро, де вони в переважній більшості стають жертвою хижаків. Цей метод застосовують лише в тих випадках, коли неможливий заводський спосіб інкубації.
Для внезаводского способу використовують апарати Сес-Гріна і Чаликова, що представляють собою дерев'яні прямокутні плавучі ящики, в які поміщають до 25 тис. Ікринок осетра або 40 тис. Ікринок севрюги.
Інкубація ікри в таких апаратах має ряд істотних недоліків:
- під час шторму багато ікри гине від механічних пошкоджень;
- пливуть по річці, іноді у великій кількості, нафтопродукти, потрапляючи в інкубаційні апарати, згубно впливають на інкубіруемой ікру;
- в апаратах Сес-Гріна ікра знищується бур'янами рибами і птахами;
- при зменшенні швидкості течії в річці сильно зростає відхід ікри;
- плавучі апарати мають незначну пропускну здатність і незручні в експлуатації.
В даний час на всіх осетрових риб у заводах інкубація ікри здійснюється на березі в спеціально обладнаних приміщеннях. Тому на цих підприємствах перераховані вище негативні фактори не впливають на результати інкубації ікри.
Інкубаційний цех складається з інкубаційного і оперативного відділень, лабораторного пункту, компресорно-холодильного ділянки, приміщення для отримання живих кормів і побутових приміщень.
В інкубаційному цеху є пристрій для наповнення та зберігання одноденних личинок. З нього личинки самопливом направляються в ємності для підрощування. Концентрація личинок в накопичувачі не повинна перевищувати 500 шт. / Л води.
В інкубаційному відділенні, яке висвітлюється з розрахунку для севрюги і білуги до 100 лк, а осетра і шипа - до 20 лк, розміщуються інкубаційні апарати. Подача води в апарати і її скидання з них здійснюється цілодобово. Водопостачання в апаратах незалежне.
Для того щоб в апарати можна було подавати чисту, фільтровану воду, в інкубаторії необхідно мати 2 зрівняльних бака, що забезпечують рівномірну подачу води до апаратів. Ємність баку розраховується з урахуванням подачі води в усі апарати протягом 20 хв у разі аварії і відключення інших джерел водопостачання.
У перший бак чиста вода надходить, підігріта теплом сонячної радіації або обігрівальних приладів, у другій - охолоджена в теплообмінниках холодильних установок. При змішуванні холодної і теплої води в певних пропорціях в інкубаційних апаратах отримують потрібну температуру води.
Від кожного бака до інкубаційним апаратів йде самостійна система трубопроводів. Для стоку пройшла через апарати води в підлозі влаштовують бетонні лотки, пов'язані з зовнішньої мережею каналізації.
Виклюнувшіхся в апаратах личинок доставляють по лотках або трубах самопливним безконтактним способом. У порівнянні з їх доставкою в відрах такий процес транспортування прискорюється в 5-6 разів.
Обладнання та інвентар, що використовуються для обслуговування личинок, повинні мати гладку поверхню і виготовлятися зі стійкого до корозії металу.
Існує кілька апаратів для інкубації ікри осетрових: П.С. Ющенко, А.Н. Щеколкіна, В.М. Федченко і Л.Т. Горбачової, Астраханського відділення Гідрорибпроекта, Н.А. Заманова і М.А. Касимова, Б.Н. Казанського, І.А. Садова та Е.М. Коханський, АзНДІРГ.
Апарати для інкубації ікри.
Інкубаційні апарати можна розділити на наступні групи:
1. Апарати для великої ікри лососевих: ікра інкубується на рибоводно рамці в стані нерухомості.
2. Апарати для дрібної ікри лососевих (белорибіца, сиги); ікра при інкубації перебуває в стані постійного руху.
3. Апарати для обесклеенной ікри осетрових; ікра при інкубації перебуває по черзі (через кожні кілька секунд) у стані спокою і руху.
4. Апарати для необесклеенной ікри осетрових, яка при інкубації знаходиться в стані нерухомості.