Кишкова паличка - найчисленніший і постійний мешканець товстого відділу кишківника людини і всіх тепло-кровних тварин. Вона виділяється в зовнішнє середовище з фекальними масами, тому використовується як індикатор фекального забруднення зовнішнього середовища і непрямий показу-тель наявності у воді хвороботворних мікробів - збудників кишкових інфекцій людини, що виділяються з фекаліями в по-ду і інші об'єкти.
Таким чином, кишкова паличка служить санітарно-показовим мікроорганізмом води. Оскільки вона не утворює спор і гине при відносно сприятливих методах знезаражуван-вання, її присутність в консервованих продуктах або воді вказує на порушення режиму консервування та на недо-татність обробки води, так як якщо кишкова паличка зберегла життєздатність, значить, могли вижити і інші неспорообразующие бактерії, такі, як дизентерійна шигелла, брюшнотифозная сальмонела та інші патогенні бактерії - збудники шлунково-кишкових захворювань.
Колі-індекс (індекс кишкової палички) - це число ки-м'язових паличок, виявлених і 1 л досліджуваної води (за міжнародними стандартами - в 100 мл).
За існуючими нормативами коли-титр питної води не повинен бути менше 333 мл (в Москві - не менше 500 мл), а колі-індекс - не більше 3 (див. 15.1.4.).
Коли-титр визначають методами бродильних проб. Дан-ні методи засновані на здатності кишкової палички теп-локровних тварин і людини розвиватися при підвищених температурах (43-44 ° С) і зброджувати цукру (маніт, глюко-зу та ін.) З виділенням газу. Існують дво- і трьохетапний бродильні методи.
Трьохетапний бродильний метод полягає в слідую-щем. На першому етапі ставлять першу бродильно пробу: різні розведення досліджуваної води за допомогою стерильний-них піпеток вносять в колби і пробірки зі спеціальними уг-леводнимі рідкими середовищами (середа Буліра, середа Ейкман, розоловой і ін.) І поплавками.
Залежно від передбачуваного мікробного забруднення-ня вододжерела застосовують різні схеми посіву. Так, при дослідженні водопровідної води роблять посіви в загальному обсязі 300 мл (2 обсягу по 100 мл і 10 обсягів по 10 мл). При дослідженні води відкритих водойм (річковий, озерної і т. Д.) Не-обхідно посіяти воду в загальному обсязі 111,1 мл (1 обсяг - 100 мл; 1 обсяг - 10 мл і по одному обсягом в 1 мл і 0,1 мл). Співвідношення між середовищем і засеваемой водою повинно бути 1. 2. Тому посіви малих кількостей води (1 мл, 0,1 мл) виконують в пробірки з розведеною середовищем (звичайної концентрації), а великі обсяги води (100 мл і 10 мл) - в концентровану середу.
Посіви вирощують в термостаті при 43-44 ° С в тече-ня 24 ч. При зазначеній температурі пригнічується розвиток мікроорганізмів, які не мають санітарно-показового зна-чення для води. Потім переглядають посіви для виявлення ознак зростання кишкової палички (наявність пухирців газу в поплавцях, зміна кольору, помутніння).
На другому етапі для підтвердження правильності виявлення зростання кишкової палички в рідкому середовищі з посе-ва з ознаками росту за допомогою бактеріальної петлі справи-ють висів в чашки Петрі із середовищем Ендо і вирощують куль-туру при 37 ° С 24 год.
Середовище Ендо складається з МПА, лактози і обесцвеченного індикатора (фуксин знебарвлений сульфитом натрію). На даному середовищі бактерії групи кишкової палички теплокровних жи-Вотня утворюють типові темно-червоні, яскраво-червоні або рожеві колонії з темним центром, мають металевий блиск або без нього. Настільки характерний зростання на середовищі Ендо цих бактерій обумовлений тим, що вони активно зброджують лактозу, продукти розщеплення якої викликають відновлення ін-індикатором фуксину, фарбувального колонії. При відсутності характерного зростання на пробу дають негативну відповідь.
При наявності типових колоній з них роблять мазки, які забарвлюють по Граму і проводять мікроскопію. Якщо в мазках виявляють дрібні неспорообразующие грамнегативні палички, то переходять до третього етапу для оконча-ного підтвердження результатів дослідження.
На третьому етапі з типових колоній, в яких при мікроскопії виявлені характерні мікробні клітини, роблять пересів в розведену рідку вуглеводну сере-ду (Буліра, Ейкман і ін.). Посіви вирощують при 43- 44 ° С протягом 24 год, після чого враховують остаточно. При наявності в посівах помутніння, газоутворення і зміни кольору дають позитивну відповідь, результати якого висловлюють у вигляді колі-титру. При відсутності газоутворення дає-ся негативну відповідь, т. Е. Дані першої бродильной проби підтверджуються.
Колі-індекс визначають методом мембранних фільтрів. Для цієї мети використовують мембранні фільтри № 3 (ультра-фільтри) - пористі плівки, виготовлені з мікроклет-чатку (нітроцелюлози), з діаметром пір 0,7 мкм. Перед фільтрацією їх піддають стерилізації подвійним кип'ятін третьому в дистильованої воді протягом 15-20 хв. Потім сте-рільним пінцетом фільтри завадять на попередньо профламбированное поверхню фільтрувального приладу Зейтца. Через фільтр Зейтца проводять фільтрацію під вакуум-розумом певної кількості досліджуваної води (через один мембранний фільтр - не більше 100 мл води).
Після закінчення фільтрації звільняють фільтроваль-ву платівку, частково розбираючи прилад. За допомогою сте-рільним пінцета фільтр кладуть осадом вгору на поверхню середовища Ендо, залитої в чашку Петрі, щільно притискаючи до сере-де. В одну чашку можна помістити 4-5 фільтрів. Після куль-тівірованія в термостаті при 37 ° С протягом 18-24 год подсчі-ють виросли на фільтрі колонії, характерні для груп-пи кишкової палички. З 2-3 колоній, типово забарвлених і безбарвних, беруть матеріал для мазків, фарбують їх по Граму і проводять мікроскопію з іммерсійним об'єктивом.
Якщо в мазках присутні дрібні грамнегативні неспорообразующие палички, з решти колонії де-гавкають пересівши в пробірки з невеликим об'ємом рідкої вугле-водного середовища (середа Буліра або ін.). Посіви вирощують при 43-44 ° С протягом 24 год. Наявність газоутворення - останній показник присутності бактерій групи кишкової палички.