Виявлення дифтерійної палички. Принципи мікробіологічної діагностики дифтерії. Діагностика дифтерії. Культивування дифтерії. Визначення токсигенності дифтерійної палички.
З метою раннього виявлення дифтерії та визначення носіїв дифтерійної палички необхідні виділення та ідентифікація збудника, а також визначення його здатності до токсінообразованію. Матеріалом для дослідження служать дифтеритические плівки, слиз з носоглотки або виділення з підозрілих поразок шкірних покривів.
Забір матеріалу на дифтерію проводять двома стерильними тампонами: один використовують для посіву, з іншого роблять мазки і фарбують їх по Граму і Найссером. Взятий матеріал слід доставляти в лабораторію не пізніше ніж через 3 год.
Бактериоскопия дифтерійної палички
Забарвлення по Граму не є специфічною, тому що дифтерійні палички порівняно погано сприймають барвники. але дозволяє побічно ідентифікувати непатогенні коринебактерії, які розташовуються у вигляді живоплоту (паралельно) або у вигляді китайських ієрогліфів. Забарвлення по Найссером дозволяє виявити характерні зерна Бабеша-Ернста і відрізнити дифтерійну паличку від ложнодіфтерійной палички С. pseudodiphtheriticum (С. hofmannii), часто мешкає в носоглотці.
Культивування дифтерійної палички
Бактерії дифтерії виділяють посівом на елективні середовища з телуриту (наприклад, Клауберга II або Маклёода), ложнодіфтерійной паличка (паличка Хофманна) телур не відновлює (див. Рис. 8 на вклейці). Для виділення чистої культури дифтерії частина підозрілої колонії засівають на скошений агар (або середу Ру), другу частину - на тверду живильне середовище для визначення токсигенності і (не обпалюючи петлі) проводять визначення цістіназной активності (проба Пізу). При позитивному результаті спостерігають утворення коричневого хмарки навколо лінії уколу. Чисту культуру ідентифікують на середовищах Хйсса, користуючись укороченим строкатим поруч (глюкоза, мальтоза, сахароза, сечовина), що дозволяє відрізнити С. diphtheriae від непатоген пих коринебактерії (рис. 14-3).
Для ідентифікації биоваров дифтерії використовують «довгий» ряд вуглеводів, що включає крохмаль і глікоген. Для повної ідентифікації можна досліджувати здатність бактерій рости в анаеробних умовах посівом уколом в стовпчик 0,5% цукрового агару (росте тільки С. diphtheriae).
Визначення токсигенності дифтерійної палички
Визначення токсигенності дифтерійної палички in vivo. Проводять підшкірним або внутрішньошкірним зараженням 0,5-1,0 мл бактеріальної культури морських свинок масою 250 г. За 24 год до зараження одну тварину імунізують дифтерійним антитоксином. При позитивному результаті неімунізованих тварини гинуть протягом 3-5 діб.
Фаготіпірованіе дифтерійної палички
Для диференціальної діагностики збудників використовують набір з 9 кору нефагов. З його допомогою можна типировать більшість токсигенних і нетоксигенних штамів биовара gravis.