Спосіб ранньої прижиттєвої діагностики аляріоза (мезоцеркаріоза) у собак і кішок

A61B10 - Інші способи і інструменти для діагностики, наприклад інструменти для взяття проби клітин, для біопсії, для діагностики шляхом вакцинації (вакцинація для профілактики або терапії A61B 17/20); визначення статі дитини в ембріональному періоді; визначення періоду овуляції (таблиці менструального циклу G06C 3/00); прилади для огляду гортані








Власники патенту RU 2302822:

Всеросійський науково-дослідний інститут гельмінтології ім. К.І. Скрябіна (RU)

Винахід відноситься до галузі ветеринарії. Спосіб включає відбір крові у тварини в пробірку з 5% -ним розчином цитрату натрію і центрифугування крові з дистильованою водою, після чого досліджують осад на наявність мезоцеркаріев. Спосіб дозволяє виявити аляріоз на ранній стадії інвазії.

Винахід відноситься до області ветеринарії, зокрема до паразитарної діагностиці гельмінтозів, а саме аляріозов (мезоцеркаріозов) у собак і кішок.

Аляріоз - досить широко поширена інвазія як на території нашої країни, так і в країнах ближнього і далекого зарубіжжя. Розвиток трематоди Alaria alata відбувається за участю трьох господарів: 1) дефинитивного - представників сімейства Canidae (собака, вовк, лисиця, єнотовидний собака, песець); 2) проміжного - прісноводних молюсків сімейства Planorbidae; 3) додаткового - безхвостих амфібій і їх пуголовків. Крім того, в біології розвитку Аляр значну роль відіграють резервуарні господарі, коло яких дуже широкий: це - безхвості амфібії, рептилії, птахи, гризуни, хижі і парнокопитні. Резервуарним хазяїном може бути і людина (2, 7). Дефінітивного господарі можуть заражатися як при поїданні додаткових господарів, так і резервуарних. Крім того, дефінітивного господарі можуть бути і резервуарними господарями одночасно, так як у них можуть знаходити як марит (дорослих трематод в тонкому кишечнику), так і мезоцеркаріев (личинок трематод в різних органах і тканинах). Патогенна роль Аляр для дефінітивного господарів складається з поразки кишечника статевозрілої формою паразита і ураження різних органів і тканин, викликаних мігруючими по організму мезоцеркаріямі. Аляріоз (мезоцеркаріоз) резервуарних господарів викликається паразитуванням мезоцеркаріев А. alata, що локалізуються в різних тканинах і органах: стінці кишечника, м'язах кінцівок, жирової тканини, серцевому м'язі, тканинах паренхіматозних органів (4, 5, 6). За нашими даними, смертність при цьому захворюванні у собак складає 6,7%, у кішок - 25%.

Відомий спосіб діагностики аляріоза по виявленню яєць трематоди в фекаліях у дефінітивного господаря (собака, лисиця, вовк) методом послідовних змивів або методом флотації (1).

Метод послідовних змивів. Для дослідження відбирають 3-5 г фекалій. Їх змішують в ступці за допомогою маточки з 10-кратним кількістю води і фільтрують через металеве сито (осередку діаметром не більше 0,19 мм). Пробу відстоюють протягом 10 хвилин. Після відстоювання верхній шар рідини зливають до появи суцільної брудної смуги, а до осаду додають свіжу порцію води і знову відстоюють 8-10 хвилин. Процедуру повторюють до тих пір, поки верхній шар рідини не стане світлим. Рідину зливають, а осад (близько 5 мл) досліджують порціями під мікроскопом при малому збільшенні (10 # x000D7; 10). Спосіб вимагає тривалого часу, і при низької інтенсивності інвазії можлива втрата яєць з водою. Ефективність виявлення яєць 60-70%.







Метод флотації. Метод заснований на принципі різниці питомої маси яєць трематоди і використовуваних сольових розчинів. Оскільки відомо, що питома маса яєць A. alata дорівнює 1,28 (3), для флотації використовують насичені розчини солей вище 1,28 - нітрату натрію. Насичений розчин нітрату натрію готують шляхом кип'ятіння солі до тих пір, поки вона не перестане розчинятися (1000 г солі на 1 літр води). Розчин проціджують через марлю і використовують після охолодження до кімнатної температури. Потім беруть 5-8 г фекалій, поміщають в фарфорову ступку і заливають невеликою кількістю насиченого розчину солі. Після ретельного розтирання фекалій в суміш додають 20-30 мл розчину солі і проціджують через металеве сито в сухий і чистий стаканчик. Суспензія відстоюють 25-30 хвилин, потім з поверхні рідини за допомогою металевої петлі з діаметром кільця 8-10 мм знімають плівку, переносять її на предметне скло, накривають покривним склом і досліджують під мікроскопом при малому збільшенні (10 # x000D7; 10). Ефективність виявлення яєць цим способом 70-80%.

Недоліком цих методів є те, що з їх допомогою діагностується кишкова статевозрілих стадія паразита через 32-45 днів після зараження тільки у дефінітивного господарів, і не діагностується мезоцеркарний (личинковий) аляріоз у резервуарних господарів, який завдає значно більшої шкоди господареві, так як вражає все органи і тканини. Крім того, половозрелая трематода може розсіювати яйця в зовнішньому середовищі і становити загрозу для подальшого зараження тварин і продовження циклу розвитку паразита.

Метою винаходу є рання (на 3-21 дні після зараження) прижиттєва діагностика аляріоза (мезоцеркаріоза) у собак і кішок (і інших тварин) методом концентрації проб крові з дистильованою водою і дослідженням їх на наявність мезоцеркаріев.

Ефективність запропонованого способу ілюструється такими прикладами:

Приклад 1. Діагностичну ефективність способу оцінювали на 60 пробах крові собак, спонтанно заражених А. alata, і 250 пробах клінічно здорових собак. Мезоцеркаріі виявили у всіх 60 собак, заражених А. alata з інтенсивністю інвазії від 1 до 3 личинок в 1 мл крові, у здорових собак личинки мезоцеркаріев не виявили.

Приклад 2. Діагностичну ефективність способу оцінювали на 16 пробах крові кішок, спонтанно заражених А. alata, і 70 пробах клінічно здорових кішок. Мезоцеркаріі виявили у всіх 16 кішок, заражених А. alata з інтенсивністю інвазії від 1 до 7 личинок в 1 мл крові, у здорових кішок личинки мезоцеркаріев не виявили.

Таким чином, ефективність виявлення мезоцеркаріев як у собак, так і у кішок склала 100%. Метод виявляє збудника на ранній стадії інвазії, що дозволяє вчасно запобігти падіж тварин або перехід захворювання в хронічну форму, лікування якої неефективно. Крім того, виявлення інвазії на ранній преімагінальних стадії дає можливість купірувати процес і не допустити розсіювання інвазії у зовнішньому середовищі.

2. Паразитарні зоонози: Доповідь Комітету експертів ВООЗ з участю ФАО. Сер. Техн. Доп. 637. - М. Медицина, 1980.

3. Потєхіна Л.Ф. // Тр. ВІГІС. - 1950. - Т.4. - С.7-17.

4. Савінов В.А. Розвиток Alaria alata (Goeze, 1782) в організмі дефінітивного господаря. Дисс. канд. біол. наук. - Калінін, 1952. - 145 с.

5. Сударіков В.Є. // Трематоди тварин і людини. - М. АН СРСР, 1959. - т.16. - С.219-631.

6. Сударіков В.Є. Трематоди тварин і людини. - М. АН СРСР, 1960. - т.18. - С.453-533.

7. Shoop W.L. Corcum K.C. // J / Parasitol. / - 1981 / - V.67, N 6. - Р.928-931.

Спосіб ранньої прижиттєвої діагностики аляріоза (мезоцеркаріоза) у собак і кішок, що полягає в тому, що виробляють відбір крові у тварини в пробірку з антикоагулянтом, в якості якого використовують 5% -ний розчин цитрату натрію, потім центрифугують з дистильованою водою, після чого досліджують осад на наявність мезоцеркаріев.