Штам бактерій hafnia alvei, що володіє здатністю продукувати термолабільних лт-ентеротоксин


Власники патенту RU 2514656:

Ідіатуллін Гульнур Азатовна (RU)

Винахід відноситься до біотехнології і може бути використано для отримання термолабільного ентеротоксину (ЛТ-ентеротоксину) і анатоксину Hafnia alvei при виробництві вакцин. Штам зберігатиметься в Державній колекції патогенних мікроорганізмів ФГБУ «Науковий центр експертизи засобів медичного застосування" Міністерства охорони здоров'я України під номером 294. штам володіє високою здатністю продукувати термолабільних ЛТ-ентеротоксин. 1 табл. 2 пр.

Пропонований винахід відноситься до біотехнології і може бути використано для отримання термолабільного ентеротоксину (ЛТ-ентеротоксину) і анатоксину Hafnia alvei при виробництві вакцин.

Штам Hafnia alvei ГКПМ №294 характеризується наступними ознаками.

За біохімічними властивостями штам відноситься до сімейства Enterobacteriaceae роду Hafnia alvei, оскільки при тестуванні на мікробіологіческомй тест-системі версії «Vitek 2 Sistems: 04/01» відповідав біохімічними властивостями цього виду.

Зростає на звичайних універсальних щільних поживних середовищах з утворенням характерних ізольованих колоній жовтуватого відтінку. У мясопептонном бульйоні викликає помутніння з випаданням осаду.

Вивчення факторів вірулентності показало, що штам є рідкісним, що володіє комплексом факторів патогенності, здатним викликати гостру токсичну пневмонію мишей (загибель тварин протягом 3 годин), некроз шкіри кролика (3,5 см в діаметрі), набряк лап мишей (з різницею 95 мг ), петля тонкого кишечника кролика 1,2 (V / L), володіє (альфатіолзавісімий, ентерогемолізін), адгезивной (позитивна Д-маннозочувствітельная і Д-маннозорезістентная реакція з еритроцитами курчати), антіінтерфероновой, антілізоцімной активностями, здатний в протістоц ідном тесті викликати загибель інфузорій-туфельок протягом 45 секунд.

Даний штам рекомендується в якості суперпродуцентів термолабільного ЛТ-ентеротоксину і як штам, що володіє комплексом факторів патогенності. Штам можна використовувати у виробництві анатоксинів та для отримання антитоксичної сироватки.

Способи визначення активності ЛТ-ентеротоксину.

Субплантарное введення мишам вагою 15-16 г 0,05 мл центрифугата 20-годинний бульонной культури викликає набряк лапки більше 100 мг. Аксьонова О.В. 1980 р

Інтраназальне введення 0,05 мл 20-годинний бульонной культури викликає гостру токсичну пневмонію у білих мишей-самців вагою 15-16 г (загибель протягом 4 годин). Войно-Ясенецького Н.К. 1957 р

Внутрішньом'язове введення 300 млн мікробних клітин 20-годинний бульонной культури викликає некроз шкіри кролика діаметром 3 см.

Під час експерименту петля тонкої кишки кролика при введенні 80 млн м.т. 20-годинний бульонной культури дає позитивний результат (V / L = l, 2).

Гріти при 56 ° С протягом 45 хв центрифугат 20-годинний бульонной культури викликає набряк лапки мишей до 30 мг, не викликаючи некрозу шкіри кролика. Гріти при 100 ° С 20-годинна культура не викликає накопичення рідини в ізольованій петлі тонкого кишечника кролика (V / L = 0,3).

Умови зберігання культури після ліофільної сушки в ампулі або вирощеної при 37 ° С на 0,3% -ному МПА (рН 7,2-7,4), залитим стерильним вазеліновим маслом, при температурі 4 ° С.

Середовища для розмноження - бульйон Хоттингера (рН 7,2), мясопептонний агар, що містить 5% еритроцитів кролика при температурі 37 ° С протягом 24 годин.

Генетичні особливості: HLy +, Ent +, MS +, MR +, LT +, ALA +, AKA +. Стійкий до ампіциліну, ампіциліну / сульбактам, цефуроксімаксетіну, чутливий до фторхінолонів.

0,1 мл 1 млрд суспензії добової агарового культури в фізіологічному розчині сіють в стерильний бульйон Хотингера (5 мл рН 7,2), інкубують в термостаті при 37 ° С протягом 20 годин, центрифугують при 6000 об / хв протягом 7 хвилин. Отриману надосадову рідину (центрифугат) в обсязі 0,05 мл вводять субплантарно в задню ліву лапку мишей-самців вагою 15-18 г. Через 24 години тварин умертвляють ефіром і ампутовані по гомілковостопного суглоба лапки зважують на торсійних вагах, при цьому центрифугат штаму Hafnia alvei №294 давав різницю між лівою і правою лапками не менше 100 мг, інші 20 штамів, здатні продукувати ЛТ-ентеротоксин від 65 до 90 мг. Контролі - нативний стерильний бульйон Хоттингера (рН 7,2) і гріти при 56 ° С центрифугат 20-годинний бульонной культури 30-35 мг, відповідно.

Результати наведені в таблиці.

0,1 мл 1 млрд суспензії добової агарового культури сіють в бульйон Хоттингера (рН 7,2), інкубують в термостаті при 37 ° С протягом 20 год і 80 млн м.т. суспензію в обсязі 1 мл вводять в сегмент ізольованою петлі тонкого кишечника кролика. Через 16 годин тварин умертвляють повітряної емболією і розраховують співвідношення обсягу ексудату до довжини сегмента (V / L). При цьому 20-годинна бульйонна культура штаму Hafnia alvei №294 виявилася здатною давати накопичення рідини у великій кількості і показник V / L склав 1,2. У решти 20 штамів, здатних продукувати ЛТ-ентеротоксин, показник V / L коливався в межах 0,9-1,0. При введенні стерильного бульйону Хоттингера і грітися при 100 ° С 20-годинний бульонной культури відношення обсягу накопиченої рідини до довжини сегмента склало 0,25 і 0,3 відповідно.

Порівняльні показники ЛТ-ентеропродуцірующей активності Hafnia alvei

Винахід відноситься до біотехнології і може бути використано для отримання рідкої форми мікробіологічних препаратів для бобових культур на основі бульбочкових бактерій.

Винахід відноситься до мікробіології, зокрема до захисту сільськогосподарських, лікарських та лісових культур. Штам Bacillus thuringiensis var.

Винахід відноситься до мікробіології, зокрема до засобів захисту рослин. Штам Bacillus thuringiensis var.

Винахід відноситься до біотехнології і може бути використано для очищення мерзлоти грунтів і водного середовища від нафти і нафтопродуктів. Вирощують штам бактерій Bacillus atrophaeus ВКПМ В-10592 і готують з нього суспензію, яку вносять в мерзлотную грунт і водне середовище.

Винахід відноситься до біотехнології. Запропоновано спосіб отримання андроста-4,9 (11) -діен-3,17-діона з фітостерини.

Винахід відноситься до біотехнології, до мікробіології, і стосується виділення та ідентифікації збудників псевдотуберкульозу і кишкового ієрсиніозу (У. Pseudotuberculosis і Y.

Винахід відноситься до області біохімії і клінічної мікробіології. Проводять вирощування золотистого стафілокока Staphylococcus aureus на живильному середовищі, що містить желточно-сольовий агар.

Винахід відноситься до галузі біотехнології. Винахід являє собою отримання живильного середовища, що створює оптимальні умови для вирощування легіонел, що містить: ферментативний гідролізат легкого свині, ферментативний гідролізат жовтка курячого яйця, калій фосфорнокислий 1-заміщений, калій фосфорнокислий 2-заміщений 3-водний, L-цистеїну гідрохлориду, вугілля активний, агар мікробіологічний і дистильовану воду при заданому співвідношенні інгредієнтів.

Винахід відноситься до галузі біотехнології і стосується способу отримання препарату на основі вакцинного штаму чумного мікроба. Представлене винахід передбачає виготовлення посівної нативной культури чумного мікроба, концентрування мікробної суспензії, приготування вакцинної суспензії та отримання сухої форми препарату, при цьому приготування посівної культури включає культивування мікробів в рідкому поживному середовищі в бутлях протягом 48 год при температурі 26 ... 28 ˚ С і безперервної аерації не менше 10 л · хв-1 пасированого стабілізованою стартовою культурою, отриманої в результаті трьох послідовних пасажів через організм морських свинок і з мішаної в співвідношенні 2: 1 зі стабілізуючою гліцерино-лактозо-поліглюкіновой рідиною, при приготуванні вакцинної суспензії використовують оптимізовану щодо компонентного складу захисну середу висушування, а лиофилизацию проводять дотримуючись певний режим.

Винахід відноситься до мікробіології і може бути використано при вивченні мікрофлори тварин, а також бактеріологічної діагностики дисбактеріозу кишечника.

Винахід відноситься до галузі біотехнології і стосується способу отримання препарату на основі вакцинного штаму чумного мікроба. Представлене винахід передбачає виготовлення посівної нативной культури чумного мікроба, концентрування мікробної суспензії, приготування вакцинної суспензії та отримання сухої форми препарату, при цьому приготування посівної культури включає культивування мікробів в рідкому поживному середовищі в бутлях протягом 48 год при температурі 26 ... 28 ˚ С і безперервної аерації не менше 10 л · хв-1 пасированого стабілізованою стартовою культурою, отриманої в результаті трьох послідовних пасажів через організм морських свинок і з мішаної в співвідношенні 2: 1 зі стабілізуючою гліцерино-лактозо-поліглюкіновой рідиною, при приготуванні вакцинної суспензії використовують оптимізовану щодо компонентного складу захисну середу висушування, а лиофилизацию проводять дотримуючись певний режим.

Винахід відноситься до галузі біотехнології і стосується технології отримання імуногенних сибіркових антигенів - протективного антигену і білка ЕА1.

Винахід відноситься до ветеринарної мікробіології, імунології, біотехнології, а саме до технології отримання антигену для діагностики бруцельозу.

Винахід відноситься до галузі медицини, зокрема до мікробіології і імунології, і стосується способу підвищення імуногенності антигенів збудника меліоїдоза - Burkholderia pseudomallei.

Винахід відноситься до галузі мікробіології та біотехнології, а саме до способу отримання липополисахарида (ЛПС) збудника чуми.

Винахід відноситься до областей мікробіології і імунології.

Винахід відноситься до медицини і стосується універсальної вакцини для лікування і профілактики хвороби Лайма для застосування у ветеринарії, на основі цельноклеточной бактеріальної вакцини або бактеріальних лізатів або очищених препаратів, що включає три найбільш патогенних геновіда Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia afzelii і Borrelia garinii, кожен з яких містить одночасно обидва імуногенних протективного білка зовнішньої мембрани OspA і OspC.

Винахід відноситься до ветеринарії та може бути використано для профілактики інфекційного кон'юнктиви-кератиту великої рогатої худоби. Спосіб профілактики інфекційного кон'юнктиви-кератиту великої рогатої худоби включає вакцинацію вакциною асоційованої проти інфекційного кон'юнктиви-кератиту великої рогатої худоби на основі антигенів бактерій Moraxella bovis і герпесвірусу типу I, при цьому за 29-31 день до вакцинації тваринам вводять підшкірно в область верхньої третини шиї в дозі 0,045-0,055 мл / кг живої маси імуностимулюючий препарат «Кероконвітін», отриманий на основі цитотоксичної сироватки з крові коней-донорів шляхом гипериммунизации їх антигеном, приготований першим із тканин очей - кон'юнктиви і рогівки великої рогатої худоби, яка перехворіла інфекційним кон'юнктиви-кератит. Тканини очей великої рогатої худоби отримують при забої тварин. Винахід дозволяє на 40% в порівнянні з використанням однієї вакцини підвищити ефективність профілактики інфекційного кон'юнктиви-кератиту великої рогатої худоби, забезпечує більш високий імунний статус організму тварин. 3 табл. 1 пр. 2 мул.


Надати фінансову допомогу
проекту FindPatent.ru