Роллерного культивування клітин. До недавнього часу тканинні культури застосовувалися у вірусології переважно у вигляді одношарових стаціонарних культур.
У багатьох випадках цей метод вирощування клітин є незамінним. Багаторічний досвід показує, що при використанні одношарових стаціонарних культур зустрічається ряд труднощів, пов'язаних з величезними витратами робочого часу і матеріалів. З цієї точки зору, більш вигідні роллерниє культури, які економічні, характеризуються оптимальним відношенням корисної площі культивування до об'єму живильного середовища і відкривають сприятливі можливості для накопичення клітинної маси.
Термін роллерниє культури позначає метод культивування, при якому клітинний моношар розташовується по всій циліндричної поверхні горизонтально обертаються судин і періодично омивається живильним середовищем. В силу певних причин деяка кількість клітин може в окремих випадках бути зважено в культуральному середовищі.
У подібному варіанті культуру клітин називають роллерного-суспензійний. Урожайність клітинної культури буде тим більше, чим більше площа, з якої збирають клітини. Дослідники використовували різні шляхи збільшення площі поверхні, на якій відбувалося прикріплення і розмноження клітин. Для цього застосовували різного характеру основи з великою питомою поверхнею тверду, губчату, з вовни, колагену, на скляних спіралях і т. Д. Широкого поширення ці методи не отримали, так як значно ускладнювали маніпуляції з клітинами, але слід зазначити описану Л. С. Ратнером і В. А. Крикуном методику багатоярусного культивування.
Клітини культивували в 1,5, 10 і 15-літрових бутлях, повністю завантажених овальними скляними трубками, розташованими паралельно поздовжній осі судин. Корисна площа при цьому зростала в порівнянні із стаціонарними одношаровими культурами в судинах того ж обсягу в 20 разів. Культивування проходило в 2 етапи.
На першому етапі бутлі обертали навколо горизонтальної осі з метою рівномірного розподілу клітин. Надалі, коли клітини прикріплялися до скла, культивування тривало в стаціонарному положенні. Описана культуральна система була успішно використана для культивування вірусу ящура. Більш ефективним виявилося обертання судин, в яких відбувалося розмноження клітин. Спочатку клітини вирощували в пробірках, але з розвитком технічного оснащення зросли обсяги культуральних судин, і від вирощування клітин в обертових пробірках дослідники перейшли до обертовим бутлях.
Ролерні культури стали застосовуватися як для накопичення клітин, так і розмноження вірусів. Для роллерного культивування використовуються спеціальні стеллажно-ярусні апарати для обертання бутлів або барабани. Найчастіше для культивування використовують 0,5 3-літрові бутлі. У виробничих умовах обсяг їх може досягати 20 літрів і більше.
Рекомендується протягом перших 30 хв. після засіву клітин забезпечити високу швидкість обертання флаконів 0,5 1,0 обмин для рівномірного розподілу матеріалів, потім перевести їх на низьку швидкість обертання 20 30 обчас. Посівна концентрація в 1 мл середовища складає для клітин СНЕВ, ВНК-21, HeLa, L - 60-80 тис для диплоїдних клітин 100-200 тис для первинних культур - 200-300 тис. Обсяг ростової середовища повинен складати 110, 120 частина обсягу роллерного флакона.
Роллерний метод культивування дозволяє отримати більшу кількість клітин. Так, з флакона ємністю 3 л можна отримати врожай клітин HeLa в 8 разів, ВНК-21 - в 9 разів, АТ - в 11 разів більший, ніж з монослойной стаціонарної культурою флакона ємністю в 1 л. Кратність економії середовищ при використанні 3-літрових флаконів становить для клітин HeLa 2,8 ВНК-21 - 5,0, АТ - 4,0. Здатністю до зростання і розмноження в роллерних умовах мають субкультури, перещеплюваних культури і рідше первинні, а також диплоїдні штами клітин. Для кращого розмноження клітин в роллерних апаратах необхідна адаптація їх до нових умов культивування.
Роллерний метод культивування дозволяє отримати велику кількість клітин. Перевагою роллерних культур в порівнянні з традиційними стаціонарними культурами є, зокрема, більш економічне використання поживних середовищ і більш високий вихід вірусного антигену на 1 2 lg. 3.4.
Всі теми даного розділу:
Види культур клітин
Види культур клітин. Перенесення клітин цілісного організму в умови життя in vitro припиняє існування їх як одного з численних структурних елементів тканини або органу, до складу котор
Приготування первинних клітинних культур
Приготування первинних клітинних культур. Первинною - називається культура, отримана з тканини і вирощується in vitro до початку субкультівірованія, тобто до першого посіву. первинна кул
Отримання моношарових перевіваемих культур клітин
Отримання моношарових перевіваемих культур клітин. Як вже зазначалося вище, одним з методів отримання перещеплюваних клітинних ліній є відбір клітин з підвищеною активністю росту і розмноження
Суспензійне культивування клітин
Суспензійне культивування клітин. У 1953 році Оуенс зі співробітниками вперше показав здатність клітин розмножуватися в рідкому середовищі у вільно суспендованих стані. З тих пір метод з
Вирощування вірусів в культурах клітин
Вирощування вірусів в культурах клітин. В даний час для виділення і розмноження вірусів тварин використовуються первинні культури, штами клітин і встановилися клітинні лінії. У загальні
Обережності при роботі з зараженими вірусами клітинами
Обережності при роботі з зараженими вірусами клітинами. Віруси надають цитопатогенну дію і служать етіологічними агентами при багатьох захворюваннях людини і тварин. Крім тог
виявлення вірусів
Виявлення вірусів. Виявити присутність вірусів і визначити їх кількість можна за допомогою цілого ряду різних тестів, наприклад 1 Активність вірусу вимірюється шляхом визначення кількості сприяння
Культивування вірусів на прикладі отримання поліовірусу типу
Культивування вірусів на прикладі отримання поліовірусу типу. В КУЛЬТУРІ КЛІТИН HeLa. Як конкретної методики культивування вірусів можна привести спосіб вирощування поліовірусу в
Хочете отримувати на електронну пошту найсвіжіші новини?
