Однією з найактуальніших проблем мікробіологічних відділень лікувально-профілактичних організацій в усьому світі є контамінація лабораторних приміщень мікроорганізмами, продуктами їх життєдіяльності, токсинами, і в т. Ч. Нуклеїновими кислотами, поширення яких набуває значущості на ділянках постановки полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР). Реакція ПЛР - високочутливий метод, теоретично дозволяє виявляти наявність всього однієї копії фрагмента ДНК шуканого мікроорганізму в присутності мільйонів інших молекул, що робить абсолютно необхідним особливо ретельне пристрій ПЛР-лабораторії і висуває на перший план проблему попадання із зовнішнього середовища в реакційну суміш молекул ДНК, здатних служити мішенями в реакції ампліфікації і давати хибнопозитивні результати.
Попадання в реакційну пробірку слідів позитивної ДНК (специфічних продуктів ампліфікації ДНК амплікон; ДНК-стандарту, який використовується в якості позитивного контролю; позитивної ДНК клінічного зразка) призводить до ампліфікації в процесі ПЛР специфічного фрагмента ДНК і, як наслідок, до появи хибнопозитивних результатів.
В процесі роботи можуть зустрітися два види контамінації:
перехресна контамінація від проби до проби (в процесі обробки клінічних зразків або при розкопуванні реакційної суміші), що призводить до появи спорадичних хибнопозитивних результатів;
контамінація продуктами ампліфікації (амплікона), що має найбільше значення, т. к. в процесі ПЛР амплікона накопичуються у величезних кількостях і є ідеальними продуктами для реампліфікації.
Як правило, визначити джерело контамінації буває дуже важко і вимагає значних витрат часу і коштів. Існує кілька способів боротьби з цим неприємним явищем. Одним з них є фотохімічні вплив на молекули ДНК. Для цього використовують псорален або изопсорален, які активуються короткочасним опроміненням ультрафіолетовим світлом. Модифіковані цими сполуками молекули ДНК не можуть брати участь в реакції ампліфікації.
Однак, як відомо, жодна біологічна або хімічна реакція не йде з 100% -ою ефективністю і, відповідно, після інактивації продуктів ампліфікації з мільярдів копій амплифицированного фрагмента хоча б кілька залишаться цілими, що істотно знижує цінність такого підходу. Крім того, завжди залишається ризик крос-контамінації від зразка до зразка в процесі пробопідготовки. Таким чином, цей метод лише в деякій мірі дозволяє усунути джерело контамінації і не гарантує від хибнопозитивних результатів.
утилізація всіх, хто знаходиться в контамінованої зоні реактивів;
утилізація досліджуваних матеріалів на всіх проміжних стадіях обробки (крім вихідної);
генеральне прибирання, хімічна і ультрафіолетова дезінфекція всіх поверхонь лабораторних приміщень;
дезінфекція меблів, робочих поверхонь, а також поверхонь корпусів приладів і обладнання хімічним методом і ультрафіолетовим випромінюванням.
Таким чином, використання імпульсних ультрафіолетових установок з ксеноновими лампами дозволяє:
забезпечити безпеку співробітників бактеріологічних лабораторій, що працюють з біологічними агентами III-IV груп патогенності;
проводити деконтамінацію приміщень біологічних лабораторій від всіх видів мікроорганізмів, включаючи їх високостійкі штами і полірезистентні форми, з ефективністю вище 99,9%;
забезпечити якість і надійність проведення пробопідготовки і ПЛР-аналізу в результаті високоефективної інактивації мікробіологічних забруднювачів;
істотно знизити кількість хибнопозитивних реакцій при постановці ПЛР-аналізів;
збільшити пропускну здатність (продуктивність) ПЛР-лабораторій за рахунок значного скорочення часу на дезінфекційну обробку.
Очевидно, що нова імпульсна плазменно-оптична технологія і установки на її основі є значно ефективнішим, надійним і зручним в експлуатації засобом обробки лабораторій в порівнянні з іншими існуючими методами.
Читайте в найближчих номерах журналу «Довідник завідувача КДЛ»