Основні правила поведінки в бактеріологічній лабораторії
1. В приміщення лабораторії не можна входити без спеціального одягу: халата, тапочок, змінному взутті.
2. В лабораторію не можна вносити сторонні речі, забороняється палити і приносити їжу.
3. При розпакуванні заразного матеріалу необхідно дотримуватися обережності: пробірки зовні обтирати дезинфікуючим розчином; переливання рідин, що містять патогенні мікроби, виробляють над посудиною, що містить дезінфікуючий розчин.
4. Якщо розбилася посуд, що містить заразний матеріал (пробірка, чашка Петрі), негайно проводиться знезараження предметів, одягу, стіл і приміщення.
5. Після закінчення роботи дезінфікують руки і поверхню робочого столу.
6. Музейні культури мікробів ставлять на зберігання в холодильник, закривають і опечатують.
7. Працівники лабораторії підлягають обов'язковій вакцинації проти тих інфекційних хвороб, зі збудниками яких вони працюють. На кафедрі мікробіології використовуються матеріали, що містять збудників # 921; # 921; # 921; - # 921; V груп, після дозволу голови режимної комісії Республіканської СЕС.
Правила забору матеріалу для мікробіологічних досліджень
При заборі і роботі з клінічним матеріалом персонал повинен використовувати рукавички і халат. Терміни доставки клінічного матеріалу в лабораторію повинні бути скорочені до мінімуму.
Кров для посіву слід брати до початку антибактеріальної терапії; на висоті підйому температури; біля ліжка хворого з дотриманням правил асептики. Посів проводиться в подвійну і тіогліколевую середу в співвідношенні 1:10.
Сеча для посіву береться до початку антибактеріальної терапії. Сеча здорової людини стерильна. Від початку взяття проби сечі до початку дослідження в лабораторії повинно проходити не більше 1-2 годин.
Гній отримують за допомогою стерильного шприца або стерильного ватного тампона.
Екскременти на патогенні ентеробактерії беруть ректальними петлями, змоченими консервантом, і поміщають в пробірку з консервирующей середовищем.
Слиз з носоглотки (на дифтерію) забирають стерильним тампоном натщесерце. Тампон поміщають в стерильну пробірку і доставляють в лабораторію не пізніше, 2-3 годин з моменту забору матеріалу.
Спинно-мозкову рідину отримують в результаті люмбальної пункції. 3-5 мл ліквору поміщають в пробірку (при транспортуванні оберігати від охолодження).
Мокротиння збирають натщесерце після ополіскування рота в стерильний посуд.
Правила забору матеріалу, зберігання і транспортування при ОНІ.
До особливо небезпечних інфекцій насамперед відноситься чума. При постановці попереднього діагнозу «чума» в лабораторії проводяться термінові заходи:
1. Негайно повідомляють в вищі органи охорони здоров'я.
2. На лабораторію накладається карантин, тобто жоден лабораторний працівник, що контактував з заразним матеріалом, не повинен залишати приміщення лабораторії до прибуття епідеміолога.
3. Всі матеріали: від хворих, чисті культури і полеглі тварини повинні бути спрямовані в спеціалізовані лабораторії для остаточного встановлення діагнозу.
Заходи безпеки при транспортуванні
Матеріал поміщають в банки з щільно закривається пробкою, обв'язують пергаментом (тобто водонепроникним матеріалом), потім обгортають серветками, змоченими 5% розчином лізолу або фенолу. У такому вигляді банки з матеріалом поміщають в металеві бікси. На банки з матеріалом наклеюють етикетки. Всі написи на етикетці роблять простим графітним олівцем, тому що написи чорнилом змиваються при дезінфекційної обробки.
4. Після відправки матеріалу проводять заключну дезінфекцію.
Культуру автоклавують при температурі 120 0 С протягом 1 години. Скляну лабораторний посуд знезаражують в 3% розчині хлораміну або карболової кислоти 1 добу, а потім кип'ятять в 1% розчині бікарбонату натрію.
Трупи тварин автоклавують, заливають 10% розчином лізолу на добу і закопують в спеціально вириту яму.
Шкіру відкритих частин тіла обробляють 70% розчином спирту.
Скласти напрямок на мікробіологічне дослідження
Направлення на дослідження є супровідним документом, який додається до інфекційного матеріалу, призначеному для лабораторних досліджень.
Складається за такою формою:
1. назва матеріалу
2. установа, що направляє матеріал
3. прізвище, ім'я, по батькові хворого
6. дата захворювання
7. дата взяття матеріалу
8. передбачуваний клінічний діагноз
9. підпис лікаря, що направляє матеріал
Поступив в лабораторію інфекційний матеріал реєструється в спеціальному журналі.
Дезінфекція в мікробіологічної лабораторії
Дезінфекція це знезараження об'єктів навколишнього середовища за допомогою хімічних речовин, що мають антимікробну дію.
Мета дезінфекції -предупредіть передачу збудників від інфікованого організму неінфікованій.
У мікробіологічної лабораторії використовують:
1. хлорне вапно (0,1-10% розчин);
2. хлорамін (0,5-5% розчин), для дезінфекції рук 0,25-0,5% розчин, для дезінфекції предметів догляду за хворими при кишкових і повітряно-крапельних інфекціях 1-3% розчин, при туберкульозі-5% розчин;
3. фенол (карболова кислота) у вигляді 3-5% розчину для дезинфекції приміщень;
4. лізол (3-5% розчин);
5. біглюконат хлоргексидину (гибитан), для дезінфекції рук 0,5% розчин, для дезінфекції приміщень 0,1% розчин;
6. дихлорид ртуті (сулема) -іноді використовують для дезінфекції предметів догляду за хворими. Препарат високотоксичний, всмоктується через шкіру.
Підготовка посуду до стерилізації
В бактеріологічних і вірусологічних лабораторіях використовують звичайну лабораторний посуд: циліндри, колби, склянки для розчинення і зберігання реактивів, хімічні пробірки. Крім цього спеціальний посуд:
- біологіческіе- з великим дном, неразвернутим краєм;
- центріфужние- звужені донизу, конічної форми;
- преціпітаціонние- дуже вузькі з внутрішнім діаметром 2-3 мм
Скляні чашки Петрі для вирощування мікроорганізмів на щільних поживних середовищах. Їх виготовляють з прозорого скла, що не має каменів, бульбашок. Висота чашки 20-30 мм, діаметр 60-200 мм.
- градуйовані повинні відповідати параметрам ГОСТу
- пастеровскіе- скляні трубки діаметром 5-7 мм, у яких один кінець відтягнуть над полум'ям пальника у вигляді капіляра.
Спеціальна лабораторний посуд повинна бути чистою і стерильної. Миття виробляють йоржами з милом і содою. Нову посуд слід до миття прокип'ятити в 1-2% розчині хлористоводневої кислоти. Сушать посуд в сушильній шафі.
Суху посуд закривають і поміщають в пенали. У пробірки вставляють ватяні пробки і загортають в пачки по 5-10 штук. До чашкам Петрі підбирають кришки і загортають по одній або декілька штук.
Піпетки закривають ваткою з того кінця, який беруть в руки. Готові піпетки загортають у папір і укладають в пенали.
Стерилізація проводиться в сухожіровом шафі при температурі 180 0 С протягом 1 години.
Етапи приготування мазка.
Для приготування мазка необхідно мати:
· Чисте знежирене предметне скло.
· Культуру, вирощену на щільному живильному середовищі- агарі, або рідкої -бульоне.
1. Знежирене предметне скло і бактеріологічну петлю пропалюють в полум'я пальника. Пробірку з досліджуваної культурою тримають між вказівним і великим пальцями лівої руки. Петлю беруть правою рукою, мізинцем правої руки притискають пробку пробірки до долоні.
Якщо мазок готується з рідкої живильного середовища, то краплю культури наносять петлею на предметне скло.
Якщо мазок роблять з культури з агару, то петлю з культурою вносять на предметне скло і додають краплю фізіологічного розчину, в якому емульгують внесений матеріал.
Петлю обпалюють у полум'ї пальника. Мазок повинен бути тонким, рівномірно розтертим, округлої форми, розміром 1,5-2см 2.
2. Висушування мазка проводиться при кімнатній температурі.
3. Фіксація мазка проводиться з метою:
· Вбити мікробні клітини.
· Забезпечити краще прилипання мікробів до предметного скла.
· Забезпечити подальше фарбування.
Фіксація мазка в полум'я пальника проводиться 3-кратно, дія полум'я повинно триває 2 секунди.
Для більш ніжною фіксації мазків крові, спірохет і найпростіших використовують хімічні фіксатори:
· Метиловий на протязі 5-и хвилин.
· Етиловий спирт (96 0) протягом 10-и хвилин.
· Суміш Никифорова - протягом 10-15 хвилин.
· Ацетон - протягом 5-и хвилин.
· Пари формаліну - протягом декількох секунд.
4. Забарвлення препаратів проводиться:
· Простими методами (водним фуксином Пфейффера, метиленової синькою Леффлера), коли забарвлюється вся клітина і використовується тільки один барвник;
· Складними методам, коли визначаються клітинні структури.
Після експозиції мазок промивають водою, висушують фільтрувальним папером і проводять мікроскопію під иммерсией.
Метод «роздавленої краплі».
Культуру в фізіологічному розчині хлориду натрію наносять на предметне скло і зверху накладають покривне. Крапля матеріалу повинна бути такої величини, щоб вона заповнювала весь простір між покривним і предметним склом і не виступала за межі покривного. Препарат розглядають з иммерсионной системою і злегка опущеним конденсором.
Необхідно мати предметне скло з луночку. Краплю культури наносять на покривне скло, зверху накладають предметне скло з луночку посередині, краї якого попередньо обмазані вазеліном. Потім предметне скло злегка притискають до покривному, і препарат перевертають покривним склом догори. Виходить герметично закрита камера, в якій крапля довго не висихає.
Приготування м'ясо-пептонного бульйону (МПБ)
Перший етап отримання м'ясної води. М'ясо, очищене від жиру і від сухожиль, пропускають через м'ясорубку, заливають подвійною кількістю холодної водопровідної води і настоюють протягом доби в прохолодному місці. Потім м'ясної настій разом з м'ясом кип'ятять протягом години, після чого остуджують, фільтрують, доливають водопровідною водою до початкового об'єму, розливають по пляшках і стерилізують при тиску 1 атм. 30 хвилин.
М'ясна вода містить мінеральні речовини, вуглеводи, вітаміни.
Другий етап до м'ясної води додають 1% сухого пептона і 0,5% хлориду натрію, кип'ятять, встановлюють рН 20% розчином їдкого натру.
Приготування м'ясо-пептонного агару (МПА)
До м'ясо-пептонному бульйону додають 2% морської водорості агар-агар, який плавиться при 100 0 С і твердне при кімнатній температурі. Після стерилізації в автоклаві м'ясо-пептони агар, розлитий в пробірки, залишають застигнути стовпчиком або готують скошений агар, укладаючи пробірки в похилому положенні під кутом 20 о.
Забарвлення мазка за Грамом.
Метод Грама введений в 1884 році датським мікробіологом Гансом Християном грам і є важливим таксономическим ознакою.
До грампозитивних бактерій відносяться ті, у яких комплекс, утворений генціанвіолетом і йодом, утримується при обробці спиртом.
Грамнегативними називають ті бактерії, які не володіють властивістю утримувати комплекс і знебарвлюються при обробці спиртом.
Здатність або нездатність клітин утримувати комплекс генціанвеолета з йодом пов'язують з різним складом і структурою клітинної стінки бактерій.
1.На фіксований мазок накладають фільтрувальний папір, просочену генціанвіолетом і наносять краплю води на 2 хвилини.
Генціанвіолет основна фарба.
2. Папір скидають і, не промиваючи водою, наливають розчин Люголя на 1 хвилину.
Розчин Люголя протрава: підсилює дію основної фарби у грампозитивних бактерій.
3. Препарат знебарвлюють 3-5 краплями спирту протягом 30секунд до припинення відходження фіолетових цівок фарби.
Спирт знебарвлюючий фактор.