Про наявність і розмноження вірусу в клітинах дізнаються по так званому цитопатичної ефекту: в результаті розмноження вірусу клітки гинуть, і під мікроскопом помітні дегенеративні зміни клітин. Пласти заражених клітин відшаровуються від стінки пробірки або флакона. Так як зростання клітин припиняється, pН середовища мало змінюється в порівнянні з контролем (клітини без вірусу).
1. Розвиток специфічної дегенерації клітин - дивляться під мікроскопом: утворення багатоядерних гігантських клітин, округлення клітин, вогнища клітинної проліферації.
2. Виявлення внутрішньоклітинних включень - в цитоплазмі або ядрі (забарвлюють і дивляться під мікроскопом).
3. Виявлення специфічного Аг методом імунофлюоресценції.
4. Позитивна реакція гемадсорбції.
5. Позитивна реакція гемаглютинації.
6. Освіта бляшок - з'являються знебарвлені ділянки в культурі, що складаються із загиблих клітин - це колонії вірусу. Фарбують червоним барвником - бляшки круглі, світлі.
Цитопатичної ефект, визначення, класифікація.
Цитопатичної ефект - дегенерація клітин, що виникає під дією розмножується в культурі тканини вірусу. Мікроскопічно цитопатическое дію, виражається в різних змінах морфології клітин, утворення гігантських багатоядерних клітин (симпластов), пікнозом ядер і, нарешті, в повній деструкції клітин. Макроскопічно помітно злущування клітин зі стінок пробірки. Характер клітинної дегенерації залежить, в основному, від виду вірусу.
12. Методи типування вірусів:
Визначення типу вірусів в вірусосодержащем матеріалі основа-но на нейтралізації вірусу типоспецифічними сироватками. Кінцевий результат реакції може бути встановлений на підставі наступних ознак:
2) нейтралізація реакції гемадсорбції;
4) затримка (гальмування) гемаглютинації;
5) світіння клітин, що містять вірус, під впливом тіпоспеціфіаческіх флуоресціюючих сироваток;
6) нейтралізація в досвіді на тварин.
Суть реакції гемадсорбції.
Гемадсорбції - адсорбція еритроцитів на поверхні уражених вірусом клітин.
Методика реакції. У пробірки про заражену вірусом культурою тканини вносять 0,2 мл 0,4% -ної суспензії еритроцитів. Пробірки струшують і залишають в похилому положенні. Тривалість контакту еритроцитів з клітинами залежить від температури інкубація і виду вірусу. Облік реакції виробляють під малим збільшенням мікроскопа після нетривалого похитування пробірки для відділення неадсорбованими еритроцитів від поверхні клітин. При вірусної гемадсорбції еритроцити міцно фіксовані на клітинах і зберігаються на них після 1-2-кратного відмивання. Адсорбируясь на поверхні уражених вірусом клітин, еритроцити утворюють характерні скупчення.
Суть методу кольорових проб.
Кольорова реакція. В основу реакції належить та обставина, що в процесі розмноження і росту клітин в живильному середовищі накопичуються кислі продукти обміну речовин, що знижують рН середовища. У тканині, зараженій вірусом, настає дегенерація клітин, в силу чого пригнічується їх метаболізм і не відбувається изме-ня рН середовища. Для виявлення цих змін в живильне середовище додають індикатор феноловий червоний. При рН вище 7 колір індикатора червоний, при рН 7 - помаранчевий і при рН нижче 7 - жовтий.
Якщо клітини не заражені вірусом (або він нейтралізований специфічною сироваткою), рH живильного середовища зсувається в кислу сторону, і вона стає жовтою. У разі розмноження вірусу клітки дегенерируют, і середовище зберігає вихідний червоний колір.
Метод кольорових проб може бути використаний для титрування ві-руса або віруснейтралізуючі антитіл.
Суть методу бляшок.
В основі методу лежить поява в монослое заражених вірусом клітин знебарвленого ділянок, що складаються з дегенерованих клітин. Ці ділянки, що отримали назву бляшок, являють собою колонії вірусу, що утворюється з однієї вірусної частки.
Метод полягає в наступному. У спеціальному флаконі на стінці моношар клітин, потім видаляють живильне середовище. Клітини заражаю вірусом і заливають агаром, що містить індикатор нейтральний червоний. Там, де відбувається ріст клітин, середа зміниться в кислу сторону і індикатор забарвиться в рожевий колір. На тих ділянках, де клітини загинули під дією вірусу, рН середовища і, отже, колір індикатора не змінюється. Такі острівці неокрашенной середовища мають вигляд білуватих бляшок.
Суть реакції гемаглютинації дляобнаруженія вірусів.
Методи мікробіологічної діагностики вірусних інфекцій.
1.Вірусоскопіческій - виявлення в досліджуваному матеріалі за допомогою методів електронної мікроскопії віріонів або за допомогою світлооптичних мікроскопів внутрішньоклітинних включень.
2.Обнаруженіе вірусів за допомогою методів іммуноелектронной мікроскопії.
3.Вірусологіческіе методи - виділення чистих культур вірусів з використанням культур клітин або курячих ембріонів.
4.Серологіческіе методи - виявлення противірусних антитіл в сироватці хворого або реконвалесцента за допомогою реакцій нейтралізації вірусів, реакції зв'язування комплементу, реакції гальмування гемаглютинації, реакцій імуноферментного методу (ІФМ), радіоімунного методу, (РИМ), реакції пасивної гемаглютинації (РПГА), реакції гемаглютинації імунного прилипання (комплекс АГ + АТ в присутності комплементу адсорбується на еритроцитах), реакцій преципітації в агарі, імлунофлуоресцентного методу. В принципі ці реакції можуть бути використані і для виявлення вірусних ан-тігенов.
5.Біологіческіе методи - зараження чутливих до даного вірусу лабораторних тварин з метою відтворення захворювання або подальшого виділення вірусу.
Що таке вірусоскопіческій метод діагностики.
Матеріал зі слизовою носа, зіву емульгують в фізіологічному розчині, осаджують і з осаду готують мазки.
Мазки після висушування обробляють типоспецифічними люмінесцірущімі сироватками і проводять мікроскопію за допомогою люмінесцентно-го мікроскопа. Клітини, що містять відповідний вірус, адсорб-ють специфічні люмінесцирующие антитіла і світяться.
Що таке вірусологічний метод діагностики.
Зараження курячих ембріонів в аллантоісную або амніотичну порожнини. Вірус виявляють шляхом реакції гемаг-глютінаціі, типують за допомогою РГГА Зараження культури тканини. У культурі тканини вірус виявляють по цитопатичної ефекту, по зміні кольору середовища і по реакції гамадсорбціі; типують по РГГА, нейтралізації ЦПЕ і реакції гемадсорбції. Зараження білих мишей. Типують вірус Мотодом нейтралізації зі специфічними сироватками.
Типи вірусних інфекцій.
1.Віруси з непродолж перебуванням вірусу в організуйте
-гостра; -бессімптомная; -абортатівная інфекція
2. Віруси з продовжить перебування вірусу в організмі
-латентні; -хронічні; -медленние
Особливості та механізми противірусного імунітету.
1. Активність Т-цитотоксичних лімфоцитів (Т-кілерів) і ін кілерних клітин
2. Активність системи інтерферону
3. Освіта віруснейтралізуючі систем
Механізми персистирования вірусів в організмі.
1. Вірус знаходиться в дефектному стані, він не здатний розмножуватися і індукувати ефект імунної відповіді
2. вірус знаходиться в клітці у вигляді вільної геномної нукл к-ти, бракує дії антитіл
3. Геном вірусу інтегрований в хромосому клітини-мішені (вірогенія)