Бактеріологічний метод дослідження - це виділення чистих культур мікроорганізмів і вивчення їх властивостей, тобто їх ідентифікація.
Матеріалом для посіву можуть бути культури бактерій, пересівати з рідких і щільних поживних середовищ, різні виділення організму тварин і людини, тканини, трупа, вода, грунт продукти харчування. Доставлений в мікробіологічну лабораторію матеріал, піддають бактеріологічному дослідженню в той же день.
Рідкий матеріал для посіву беруть петлею або піпеткою. Піпетками користуються в тому випадку, коли матеріал засівають у великому або точно відміряють обсязі. Спосіб взяття щільного матеріалу визначається його консистенцією. Найчастіше користуються бактеріальної петлею. Іноді матеріал може розташовуватися в рідини нерівномірно, утворюючи плівку або осад. В цьому випадку потрібно взяти частку плівки або крупинки осаду. При необхідності матеріал, взятий з бульонной культури, емульгують. Залежно від характеру посівного матеріалу, від мети дослідження, використовуваного середовища існують різні методи посіву.
Основна вимога - захистити посів від сторонніх мікроорганізмів.
Посів з пробірки в пробірку з рідким середовищем:
Застосування в мікробіологічній практиці:
1. Визначення типу дихання мікроорганізмів.
2. Накопичення мікробної маси
Пробірки з посівним матеріалом і з середовищем тримають похило в лівій руці між великим і вказівним пальцями, так, щоб краї пробірок були на звичайному рівні, а їх підстави знаходилися поверх кисті. Пробірку з посівним матеріалом тримають ближче до себе, в правій руці, як писальний перо, тримають бактеріальну петлю і стерилізують її. Мізинцем і краєм долоні правої руки виймають обидві пробки гвинтовими рухами одночасно. Краї пробірок пропалюють в полум'я пальника. Прокаленную петлю охолоджують і, набравши трохи матеріалу, обережно переносять в пробірку з середовищем. Петлю занурюють в рідину, матеріал розтирають по стінці пробірки і змивають середовищем. Після посіву петлю витягають з пробірки, краю пробірок обпалюють і, провівши пробки через полум'я пальника, закривають пробірки, після чого прожарюють петлю
Посів з пробірки в пробірку зі скошеним агаром:
Застосування в мікробіологічній практиці: накопичення мікробної маси.
Пробірки з посівним матеріалом і з середовищем тримають похило в лівій руці між великим і вказівним пальцями, так, щоб краї пробірок були на звичайному рівні, а їх підстави знаходилися поверх кисті. Пробірку з посівним матеріалом тримають ближче до себе, в правій руці, як писальний перо, тримають бактеріальну петлю і стерилізують її. Мізинцем і краєм долоні правої руки виймають обидві пробки гвинтовими рухами одночасно. Краї пробірок пропалюють в полум'я пальника. Прокаленную петлю охолоджують і, набравши трохи матеріалу, обережно переносять в пробірку з середовищем. Матеріал розтирають по поверхні середовища зигзагоподібними рухами від низу до верху, починаючи від кордону конденсату. Після посіву петлю витягають з пробірки, краю пробірок обпалюють і, провівши пробки через полум'я пальника, закривають пробірки, після чого прожарюють петлю.
Посів по Шукевичу:
Застосування в мікробіологічній практиці: виділення чистої культури і визначення рухливості у протея.
Пробірки з посівним матеріалом і з середовищем тримають похило в лівій руці між великим і вказівним пальцями, так, щоб краї пробірок були на звичайному рівні, а їх підстави знаходилися поверх кисті. Пробірку з посівним матеріалом тримають ближче до себе, в правій руці, як писальний перо, тримають бактеріальну петлю і стерилізують її. Мізинцем і краєм долоні правої руки виймають обидві пробки гвинтовими рухами одночасно. Краї пробірок пропалюють в полум'я пальника. Прокаленную петлю охолоджують і, набравши трохи матеріалу, обережно переносять в пробірку з середовищем. Матеріал поміщають в конденсат, який утворюється між дзеркалом середовища і стінкою пробірки. Після посіву петлю витягають з пробірки, краю пробірок обпалюють і, провівши пробки через полум'я пальника, закривають пробірки, після чого прожарюють петлю.
Посів з пробірки в пробірку «стовпчиком»:
Застосування в мікробіологічній практиці:
- Визначення рухливості мікроорганізмів.
- Визначення протеолітичної активності на желатинових середовищах.
- Визначення сахаролитической активності на полужидкой середовищі Гіса.
Пробірки з посівним матеріалом і з середовищем тримають похило в лівій руці між великим і вказівним пальцями, так, щоб краї пробірок були на звичайному рівні, а їх підстави знаходилися поверх кисті. Пробірку з посівним матеріалом тримають ближче до себе, в правій руці, як писальний перо, тримають бактеріальну петлю і стерилізують її. Мізинцем і краєм долоні правої руки виймають обидві пробки гвинтовими рухами одночасно. Краї пробірок пропалюють в полум'я пальника. Прокаленную петлю охолоджують і, набравши трохи матеріалу, обережно переносять в пробірку з середовищем. Петлею з посівним матеріалом проколюють стовпчик до дна, виробляючи, так званий посів «уколом». Після посіву петлю витягають з пробірки під контролем очі. Краї пробірок обпалюють і, провівши пробки через полум'я пальника, закривають пробірки, після чого прожарюють петлю.
Посів з пробірки в пробірку з комбінованої середовищем:
Застосування в мікробіологічній практиці:
- Визначення сахаролитической активності.
- Визначення протеолітичної активності.
- Накопичення мікробної маси.
Пробірки з посівним матеріалом і з середовищем тримають похило в лівій руці між великим і вказівним пальцями, так, щоб краї пробірок були на звичайному рівні, а їх підстави знаходилися поверх кисті. Пробірку з посівним матеріалом тримають ближче до себе, в правій руці, як писальний перо, тримають бактеріальну петлю і стерилізують її. Мізинцем і краєм долоні правої руки виймають обидві пробки гвинтовими рухами одночасно. Краї пробірок пропалюють в полум'я пальника. Прокаленную петлю охолоджують і, набравши трохи матеріалу, обережно переносять в пробірку з середовищем. Матеріал розтирають по поверхні середовища зигзагоподібними рухами від низу до верху, починаючи від кордону конденсату. Потім петлею з посівним матеріалом проколюють стовпчик до дна, виробляючи, так званий посів «уколом». Після посіву петлю витягають з пробірки під контролем очі. Краї пробірок обпалюють і, провівши пробки через полум'я пальника, закривають пробірки, після чого прожарюють петлю.
Посів у флакони піпеткою:
Застосування в мікробіологічній практиці: санітарно-бактеріологічне дослідження води.
Посів також, як в пробірки, тільки спочатку матеріал набирають в піпетку, а потім відкривають посудину з середовищем і вносять матеріал.
Посів на середовища в пробірки (рідке середовище, напіврідка середовище, скошений агар, комбіновану середу) з чашки Петрі:
Застосування в мікробіологічній практиці:
- Накопичення мікробної маси на скошеному агарі.
- Визначення сахаролитической активності
- Визначення протеолітичної активності на полужидкой желатиновой середовищі.
- Визначення типу дихання мікроорганізмів на рідкому середовищі.
- Визначення рухливості.
Виросли на чашці Петрі колонії вивчають, вибирають ті, які необхідно досліджувати далі і обводять олівцем по склу з боку дна. Потім чашку з матеріалом ставлять перед собою кришкою вгору. Відкривають кришку і вводять під неї обпалену петлю. Остудивши петлю, набирають посівний матеріал. Виймають петлю, закривають чашку і в ліву руку беруть пробірку з середовищем. Посів проводять також, як з пробірки в пробірку. Після посіву чашку перевертають догори дном.
Посів на чашку Петрі шпателем:
Застосування в мікробіологічній практиці: виділення чистої культури.
Лівою рукою злегка відкривають кришку, тримаючи її великим і вказівним пальцем. Петлею або піпеткою наносять на поверхню середовища матеріал, після чого ретельно втирають його круговими рухами шпателя до тих пір, поки шпатель не перестане вільно ковзати по поверхні середовища. При цьому лівою рукою притримують кришку і одночасно обертають чашку.
Увага! Шпатель для роботи беруть стерильний і він розгортається безпосередньо перед посівом.
Після посіву виймають з чашки і закривають кришку. Скляний шпатель поміщають в дезраствор, а металевий прокаливают над полум'ям спиртівки.
Посів на чашку Петрі петлею:
Застосування в мікробіологічній практиці: виділення чистої культури.
Невелика кількість посівного матеріалу втирають петлею в поверхню середовища у краю чашки, кілька разів провівши петлею з боку в бік (скидання). У місці, де закінчилися штрихи, агар проколюють петлею, знімаючи надлишок посівного матеріалу (скидання матеріалу). Що залишився на петлі посівний матеріал зигзагоподібними рухами розподіляють по всій поверхні середовища, штріхообразним рухами від стінки до стінки. Після посіву закривають чашку і пропалюють петлю.
Посів на чашку Петрі петлею на сектори:
Застосування в мікробіологічній практиці: виділення чистої культури.
Чашку з боку дна розкреслюють на сектори невелика кількість посівного матеріалу втирають петлею в поверхню середовища у краю чашки, кілька разів провівши петлею з боку в бік. Після того місця, де закінчилися штрихи, агар проколюють петлею, знімаючи надлишок посівного матеріалу (скидання матеріалу). Що залишився на петлі посівний матеріал зигзагоподібними рухами розподіляють від краю чашки до центру так, щоб штрихи не заходили на сусідній сектор. Після закінчення посіву закривають чашку і пропалюють петлю.
Застосування в мікробіологічній практиці:
- Постановка антибіотикограми.
- Проведення фаготипирования.
1 мл рідкої культури (якщо культура з щільною середовища, її емульгують в стерильному фізіологічному розчині хлориду натрію або бульйоні) наносять на поверхню агару і ретельно розподіляють рідину по поверхні середовища, злегка обертаючи чашку. Потім чашку трохи нахиляють і піпеткою відсмоктують надлишок культури, виливаючи її в дезінфікуючий розчин. Туди поміщають піпетку, попередньо від'єднавши від неї грушу.
Судини з засіяної культурою підписують і поміщають в термостат.