1.Взятіе гістологічного матеріалу: Чи від живої тварини (біопсія, пункція) або від трупа. З відповідного органу вирізують невеликі шматочки (0,5 x 1 x 1 см) - де 0,5 - товщина. Береться не пізніше 3 год. після смерті при кімнатній температурі (при +4 не більше 12 ч.). Матеріал береться на межі здорової і хворої тканини. Потім поміщають в фіксатор (яка фіксує рідина).
Якщо токсикологічне дослідження (при підозрі на отруєння) - матеріал тільки свіжий (шлунок і його вміст, шматочок тонкого кишечника і його вміст, нирка, печінка і ділянки явних уражень) .Бактеріологіческое дослідження - свіжий матеріал (лімфовузли, селезінка, нирки, печінку, іноді трубчастих кісток і ділянки з видимими змінами)
2.Фіксація матеріалу: Фіксація проводиться для попередження процесів аутолізу (самопереваріванія) тканин. Це досягається шляхом денатурації (коагуляції) білків. Фіксатори: 1.Формалін (не підходить для дослідження на глікоген); 2 Спирт (70%) (3-4 тижні зберігає препарат), не підходить для дослідження на жири; 3 Складні фіксатори (складаються з багатьох компонентів на основі пікринової к-ти ) .4 осмієва кислота (для електронної мікроскопії)
3.Обезвожіваніе: зразки зневоднюють (інакше гідрофобний ущільнювач не зможе проникнути в тканину). Для цього їх "проводять" по батареї спиртів - 70%. 80%. 96%. 100% етанол -по 24 години в кожному спирті. Зразки витримують потім в суміші етанол-ксилол і в чистому ксилоле.
4.Уплотненіе. Потім зразки ущільнюють - щоб в подальшому їх можна було різати на мікротому. Часто в якості ущільнювача використовують парафін або целлоидин. Заливка: поміщають зразки в суміш ксилол-парафін і потім в рідкий парафін на 1-2 ч при 52-56 о С. Дають парафіну, охолоджуючись, затвердіти; вирізують з нього блок з ув'язненим зразком і закріплюють на дерев'яному кубику. Також використовують заливку в смоли, желатин і заморожування.
2.Техніка виготовлення гістосрезов, їх забарвлення і висновок.
Далі готують зрізи за допомогою апарату мікротом: 1. Кубики вставляють в спеціальний прилад - мікротом, - службовець для приготування зрізів. 2. а) За допомогою мікрометричною механічної системи об'ектодержатель разом з кубиком переміщається за кожен крок на певну відстань (напр. 10 мкм) .б) А мікротомних ніж, що направляється під кутом до поверхні парафинового блоку, зрізає з нього тонкої шар органу (зріз) заданої толщіни.3. Зрізи поміщають на поверхню теплої води для їх розправлення, а потім - на предметне скло.
Перед фарбуванням зразки звільняють від парафіну, проводячи по батареї розчинників: ксилол, спирт 100%, 96%, 80%, 70%, 60%, вода (по 2-5 хв) (Цей ряд закінчується водою в тому випадку, якщо потім використовується водорозчинний барвник.) Для фарбування предметні стекла зі зрізами поміщають на короткий час в розчин барвника, промивають водою, обробляють розчином іншого барвника (якщо такий використовується теж) і знову промивають водою. Препарат знову зневоднюють (проводячи по батареї спиртів зі зростаючою концентрацією), а потім прояснюють (в карбол-ксилолі і ксилоле) - для видалення зайвої фарби. Нарешті, на препарат наносять краплю канадського бальзаму (в разі зрізу) або кедрової олії (на мазки крові) і накривають покривним склом.
Гістологічні барвники (основні, кислі, спеціальні). Спочатку фарбування основними барвниками, вони фарбують ядра. Основні барвники: гематоксилін - забарвлює ядра в фіолетовий колір; кармін - в червоний; тіонін - в синій. Кислі барвники (забарвлюють цитоплазму): еозин - в рожевий; оранж - в помаранчевий; ауранція - в жовтий; індигокармін - синій. Спеціальні барвники (забарвлюють вибірково): пикрофуксином - забарвлює сполучну тканину в червоний, інше в жовтий; смесьМаллорі - забарвлює сполучну тканину в синій; судан - фарбує жири; муцікармін - забарвлює слиз в фіолетовий; тіонін - слиз в блакитний.